ELISA实验四种常用的方法优点与缺点

　　ELISA是一种广泛应用在测定液体样本中的蛋白、抗体、或激素的免疫分析技术。酶联免疫吸附试验的标准程序，通常是把蛋白、抗体、或激素等(即抗原)直接或是以捕捉抗体固定在固相载体上，再加入一级检测抗体，形成一个抗原抗体的复合物。如果该抗体已经用酶标记了，即可用来直接测定抗原的量，若无，则可利用另一个酶标记的二级抗体来测定抗原的量。测定抗原量的方法是加入该酶的底质，作用后产生出现的颜色深浅和样本中的抗原量呈正比的关系，依此原理计算出样本中的抗原总量或浓度。以下是ELISA实验四种常用的方法优点与缺点分析比较：
 

　　1、直接法
 

　　优点：操作简单快捷，步骤少，实验周期更短，避免了交叉反应，测定结果不容易出错
 

　　缺点：酶标记抗体成本高，不是所有抗体都适用
 

　　2、间接法
 

　　优点：高灵敏度，更经济，更灵活，利用了酶标二抗，信号得到放大‌
 

　　缺点：可能存在交叉反应，实验周期较长
 

　　3、双抗体夹心法
 

　　优点：高特异性和高灵敏度，能够与复杂的样品基质兼容，一步法和二步法各有特点，一步法操作简便但易出现非特异性干扰，二步法可以减少非特异性干扰，提高实验的准确性‌
 

　　缺点：实验流程较长，需要使用酶标抗体和固相载体，成本较高
 

　　4、竞争法
 

　　优点：适用于小分子抗原，数据再现性高‌
 

　　缺点：整体的敏感性和特异性都较差，需要对样本进行稀释.‌