补体3a（C3a）试剂盒*

丙二醛(MDA)试剂盒基本信息

丙二醛(MDA)是常用的膜脂过氧化指标，在酸性和高温度条件下，可以与硫代酸(TBA)反应生成红棕色的*川(3，5，5—*基恶唑-2，4。二酮)，其zui大吸收波长在532nm。但是测定植物组织中MDA时受多种物质的干扰，其中zui主要的是可溶性糖，糖与TBA显色反应产物的zui大吸收波长在450nm，但532nm处也有吸收。植物遭受干旱、高温、低温等逆境胁迫时可溶性糖增加，因此测定植物组织中MDA—TBA反应物质含量时一定要排除可溶性糖的干扰。低浓度的铁离子能够显著增加TBA与蔗糖或MDA显色反应物在532、450nm处的消光度值，所以在蔗糖、MDA与TBA显色反应中需一定量的铁离子，通常植物组织中铁离子的含量为每克千重100—300ug·g-1，根据植物样品量和提取液的体积，加入Fe3+的终浓度为0．5umol·L-1。

丙二醛(MDA)试剂盒检测技术简介

双抗体夹心法

　　1.　包被：用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃ 过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。（简称洗涤，下同）。

　　2.　加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。（同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔）。

　　3.　加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体（经滴定后的稀释度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。

　　4.　加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。

　　5.　终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。

　　6.　结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。

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补体3a（C3a）试剂盒基本信息

补体(complement，C)是存在于正常人和动物血清与 组织液中的一组经活化后具有酶活性的蛋白质。早在19世纪末Bordet即证实，新鲜血液中含有一种不耐热的成分，可辅助和补充特异性抗体，介导免疫溶菌、溶血作用，故称为补体。补体是由30余种可溶性蛋白、膜结合性蛋白和补体受体组成的多分子系统，故称为补体系统（complement system）。根据补体系统各成分的生物学功能，可将其分为补体固有成分、补体调控成分和补体受体（CR）。

补体3a（C3a）试剂盒的显色与比色

显色

　　显色是ELISA试验中zui后一步温育反应，此时酶催化无色的底物生成有色的产物。反应的温度和时间仍是影响显色的因素。适当提高温度，有助于加速显色。在一定时间内，阴性孔可保持无色，而阳性孔则随时间的延长而呈色加强。在定量检测中，加入底物后的反应温度和时间应按规定力求准确。ELISA显色结果通过酶标仪进行，可减少实验误差，提高临界值样本的分析准确度。尽量避免肉眼直接判断结果，因为不同个体的视觉存在差异。应注意，加显色剂时，要保持显色剂不外流。加终止液时应避免产生较多气泡，否则可能使假阳性结果的出现概率增加。

比色

　　比色的方法有目视法和酶标比色法2种。目视法简单明了，但对同一标本，操作者的不同有时会出现不同的结果，具有一定的主观性。比色的结果通常用光密度表达，现按规定用吸光度表达。酶标仪不应安置在阳光或强光照射下，操作时的适宜室温在15℃~30℃之间，使用前要先预热仪器15~30min，使测得结果更为准确。比色前，应先用洁净的吸水纸擦拭干净板底附着的液体，然后将板正确放在酶标比色仪的比色架上。综上所述，的试剂，良好的仪器和正确的操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条件。在实际应用过程中，操作者必须熟练掌握基本操作技能，对每个环节进行严格仔细的核查，尽量避免假阳性和假阴性反应的出现，保证检测结果真实可靠，为诊断和疾病防治提供可靠的理论依据。

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