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游离脂肪酸试剂盒的测定原理,FFA试剂盒现货供应
游离脂肪酸含量测定试剂盒的测定意义:
FFA 既是脂肪水解的产物,又是脂肪合成的底物。FFA 的浓度与脂类代谢、糖代谢、内分泌 功能有关,也可反映食物贮藏中的品质变化。
测定原理:
在弱酸性条件下,FFA 与铜盐反应生成铜皂,在 715nm 处有特征吸收峰,在一定范围内游 离脂肪酸含量与显色程度呈线性关系。
自备仪器和用品: 研钵、台式离心机、可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿。 试剂组成和配制:
试剂一:液体×1 瓶,4℃保存。 试剂二:液体×1 瓶,4℃保存。
试剂三:液体×1 瓶,4℃保存。
样品中 FFA 提取:
1、 血液:将所取血液,室温静置 1 h 后,于 4 ℃ 离心机 3500 rpm 离心 15min,取上清 0.1mL, 加 1.2mL 试剂一,震荡提取 3h,8000rpm,4℃离心 10min,取上清液待测。
2、 组织:组织用蒸馏水冲洗干净后,用吸水纸吸取表面水分,捣碎后称取约 0.1g 转移至离 心管,按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:12 的比例加入试剂一,震荡提取 3h, 8000rpm,4℃离心 10min,取上清液待测。
3、 细菌、真菌:按照细胞数量(104 个):试剂一体积(mL)为 500~1000:1.2 的比例(建 议 500 万细胞加入 1.2mL 试剂一)加入试剂一,冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超 声 2 秒,间隔 3 秒,总时间 3min);震荡提取 3h,然后 8000rpm,4℃,离心 10min,取 上清待测。
游离脂肪酸试剂盒的测定原理,FFA试剂盒现货供应测定操作:
1. 分光光度计预热 30 min 以上,调节波长到 715 nm。
2. 对照管:取上清液 1mL,加 0.5mL 试剂二,充分震荡 5min,室温静置 5min,取上层 0.8mL
于 1mL 玻璃比色皿,调零。
3. 测定管:取上清液 1mL,加 0.5mL 试剂三,充分震荡 5min,室温静置 5min,取上层 0.8mL
于 1mL 玻璃比色皿,测定吸光值,记为 A。 记为 A 测定管。
标准曲线:y=0.0075 x+ 0.0055,R2=0.994
1. 血液中 FFA 含量计算
FFA(μ mol/L)=(A-0.0055)÷0.0075×V 反总÷V 样=1333×(A-0.0055)
2. 组织中 FFA 含量计算
(1)按样本蛋白浓度计算
FFA(μ mol/mg prot)=(A-0.0055)÷0.0075×V 反总÷(V 样×Cpr)= 0.133×(A-0.0055)÷Cpr
(2)按样本质量计算
FFA(μ mol/g)= (A-0.0055)÷0.0075×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)= 0.16×(A-0.0055)÷W
3. 按细胞数量计算
FFA(μ mol/104 cell)= (A-0.0055)÷0.0075×V 反总÷(V 样÷V 样总×细胞数量)
= 0.16×(A-0.0055)÷细胞数量
V 样总:上清液总体积,1.2 mL;V 反总:反应总体积,1mL;V 样:加入样本体积,1mL;
W:样本鲜重,g;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL
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