信帆生物告知您：PCR实验中DNA的提取方法

信帆生物告知您：PCR实验中DNA的提取方法

我们在做PCR实验的时候，经常需要用到DNA提取或者RNA提取，今天就让我们来了解一下DNA提取方法。

DNA 提取方法（以酵母为例，其余参照相关说明书）

使用试剂：基因组 DNA 提取试剂盒（GENEray）：细胞组织（GK0120)、血 液（GK1041)、细菌（GK1071)、酵母（GK1091)

1.  取 1-2ml 过夜培养的酵母菌液，加入至 1.5ml 离心管中，室温 8,000rpm 离 心 1 分钟，尽量吸除上清，收集菌体。

2. 向菌体中加入 200ul LysisY Buffer， 加入 5ul Lyticase,  充分混匀，30℃温育

30min。

3. 8,000rpm 离心 5min，弃上清，收集沉淀。

4. 向沉淀中加入 200ul TE 溶液重悬沉淀，充分混匀。

5. 在 200ul TE 悬浮样品中，加入 300ul Digestion Solution，混匀；加入 4ul RNase A 混匀，55℃保温 10 分钟；再加入 4µl Proteinase K， 55℃保温 10～30 分 钟。

6. 依次加入 300ul Ext 溶液和 300ul PB 溶液，充分摇动混匀，12000rpm 室温 离心 5 分钟，溶液将分为上下两层，上层溶液为蓝色，基因组 DNA 存在于 下层溶液中，两层中间可能会有一些沉淀物。然后用 1ml Tip 头伸到下层， 将下层中溶液全部转移到套放于 2ml 收集管内的 GenClean 柱中，注意尽量 不要吸到上层溶液和中间层沉淀。

注意：此步骤加入 Ext 和 PB 溶液后，一定要充分摇匀，否则后面离心时杂 质不容易分层。

7. 8,000rpm 室温离心 1 分钟。取下 GenClean 柱，弃去收集管中的废液。

8. 将 GenClean 柱放回收集管中，加入 500ul Wash Solution，8,000rpm，室温 离心 1 分钟。取下 GenClean 柱，弃去收集管中的废液。

9.  重复步骤 8 一次。

10. 将 GenClean 柱放回收集管中，12,000rpm，室温离心 1 分钟，以去除残留 的 Wash Solution。

11. 将 GenClean 柱放入新的洁净的 1.5ml 离心管中，在 GenClean 柱中央加入

50～100ul Elution Buffer，室温或 37℃放置 2 分钟。

12. 12,000rpm，室温离心 1 分钟。离心管中的液体即为基因组 DNA。根据用途，样 品可以 4℃或-20℃保存。

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