免疫荧光实验检测有直接法和间接法两种您知道吗？

免疫荧光实验检测有直接法和间接法两种您知道吗？信帆生物提供免疫荧光实验技术服务，检测效果好，时间短，数据真实有效，提供图片，实验报告，实验室仪器型号，所用抗体型号等，如果您对免疫荧光实验检测感兴趣可找信帆生物，为您的科研实验助力！

免疫荧光技术（Immunofluorescence technique）又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展很早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合，利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。它是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光基团，再用这种荧光抗体（或抗原）作为探针检查细胞或组织内的相应抗原（或抗体）。利用荧光显微镜可以看见荧光所在的细胞或组织，从而确定抗原或抗体的性质和定位。

免疫荧光技术是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光素，制成荧光抗体，再用这种荧光抗体（或抗原）作为探针检测组织或细胞内的相应抗原（或抗体）。在组织或细胞内形成的抗原抗体复合物上含有标记的荧光素，利用荧光显微镜观察标本，荧光素受外来激发光的照射而发生明亮的荧光（黄绿色或橘红色），可以看见荧光所在的组织细胞，从而确定抗原或抗体的性质、定位，以及利用定量技术测定含量。

免疫荧光有直接法和间接法两种。（1）直接法：将标记的特异性荧光抗体，直接加在抗原标本上，经一定的温度和时间的染色，用水洗去未参加反应的多余荧光抗体，室温下干燥后封片、镜检。（2）间接法：如检查未知抗原，先用已知未标记的特异抗体（抗体）与抗原标本进行反应，用水洗去未反应的抗体，再用标记的抗抗体（第二抗体）与抗原标本反应，使之形成抗原—抗体—抗体复合物，再用水洗去未反应的标记抗体，干燥、封片后镜检。如果检查未知抗体，则表明抗原标本是已知的，待检血清为抗体，其它步骤的抗原检查相同。标记的抗抗体是抗球蛋白抗体，同于血清球蛋白有种的特异性。

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免疫荧光染色

固定

将细胞爬片用0.02M PBS洗去培养基，再用4%甲醛固定30min，0.02M PBS洗3min×3次；

一抗孵育

滴加一抗（选择稀释比例），湿盒孵育， 4℃孵育过夜。0.02M PBS冲洗3min×3次。

二抗孵育

滴加合适比例稀释的荧光二抗，湿盒孵育，室温下放置1h。0.02M PBS冲洗3min×3次。

封片和拍照

防淬灭封片剂与DAPI 1:500稀释封片，-20℃冰箱保存，荧光显微镜拍片。

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