蛋白快速银染试剂盒操作步骤

蛋白快速银染试剂盒操作步骤

信帆生物供应蛋白快速银染试剂盒，产品现货供应，欢迎大家咨询！

自备材料：

1、水平摇床或侧摆摇床

2、去离子水(超纯)

3、乙醇、冰乙酸

1、准备工作：以下操作以 8.5×5.5cm、厚度为 1.0mm 的凝胶为例，以凝胶全部浸没到溶

液为准，一般用量是 25ml，对于凝胶体积的，各溶液的使用量需按凝胶体积比例

放大。整个银染过程应在摇床上进行，摇床转速控制在 60～70rpm。提前配制固定液，

即按无水乙醇:冰乙酸:去离子水=5:1:4 的比例配制。提前配制洗涤液，即按无水乙醇:去

离子水=1:4 的比例配制。

2、水洗：电泳结束后，取凝胶放入去离子水中清洗 2 次，每次 5min。

3、固定：取凝胶放入 50～100ml 固定液中，在摇床上室温摇动 15～20min，重复固定步

骤 1 次

4、洗脱：取凝胶放入洗涤液中清洗 2 次，每次 5min。

5、水洗：去离子水清洗凝胶 2 次，每次 5min。

6、增敏：配制银染增敏工作液，即取   Silver Stain Sensitizer(500×)0.1ml  加入到 50ml

去离子水中，混匀，即1×Silver Stain Sensitizer，一般应2h内用完。室温下用1×Silver  Stain

Sensitizer 孵育凝胶 2min，立即用去离子水清洗凝胶 2 次，每次 1min。

7、银染：配制银染工作液，即取 Silver Stain(100×)0.5ml 加入到 50ml 去离子水中，混匀，

即得 1×Silver Stain，一般应 2h 内用完。取凝胶入 1×Silver Stain，在摇床上室温摇动 10～

20min。

8、水洗：弃液，在摇床上用去离子水清洗凝胶 2 次，每次 30s，摇动速度在 60～70rpm。

总的水洗时间应控制在 1.5min 内。

9、显影：配制银染显影工作液，即取 Silver Stain Developer(5×)10ml 加入到 40ml 去离

子水中，混匀，即 1×Silver Stain Developer，一般应 30min 内用完。清洗凝胶后，立即

置于 1×Silver Stain Developer 中，室温孵育 2～10min，直至蛋白条带清晰可见。一般

显色 30s 后就会出现棕色沉淀，继续显影 2～3min，亦可延长至 5min 以上，如果显影效

果不佳，可重新更换 1×Silver Stain Developer 继续显影。

10、迅速用去离子水清洗凝胶以避免显影过度，背景染色。立即加入银染终止液，摇床上

摇动 10min，以终止显色反应。(配制银染终止液，即取 Silver Stain Stop Buffer(10×)10ml

加入到 90ml 去离子水中，混匀，即 1×Silver Stain Stop Buffer，一般应 24h 内用完。)

11、保存：弃终止液，加入去离子水 50ml，摇床上摇动 2～5min，弃液。短期保存于新鲜

去离子水，保存可以制备干胶。

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