β-1,3葡聚糖酶（β-1,3-GA）检测试剂盒原来可以检测植物样本

β-1,3葡聚糖酶(β-1,3-GA)检测试剂盒原来可以检测植物样本

测定意义：                          
β-1,3-GA( EC 3.2.1.73)主要存在植物中，催化β-1,3-葡萄糖苷键水解。在植物染病或处于其他逆境条件下，可诱导细胞大量合成β-1,3-GA，因此β-1,3-GA活性测定广泛应用于植物病理和逆境生理研究。

测定原理：
β-1,3-GA水解昆布多糖，内切β-1,3-葡萄糖苷键，产生还原末端，通过测定还原糖生成速率来计算其酶活性。
 

产品内容： 提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存；

试剂一：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前每瓶加入 3.5mL 双蒸水，充分溶解待用；

试剂二：液体 30mL×1 瓶，4℃保存； 标准品：粉剂×1 支，4℃保存，含 10mg 无水葡萄糖（干燥失重<0.2%），临用前加入 1ml 蒸馏 水溶解，配制成 10mg/ml 葡萄糖溶液备用，4℃可保存 1 周，或者用饱和苯甲酸溶液溶解，可保存 更长时间。

标准品准备：将标准品用蒸馏水稀释至 1、0.8、0.6、0.4、0.2mg/ml。

产品说明： β-1,3-GA( EC 3.2.1.73)主要存在植物中，催化β-1,3-葡萄糖苷键水解。在植物染病或处于其他逆 境条件下，可诱导细胞大量合成β-1,3-GA，因此β-1,3-GA 活性测定广泛应用于植物病理和逆境生理 研究。 β-1,3-GA 水解昆布多糖，内切β-1,3-葡萄糖苷键，产生还原末端，通过测定还原糖生成速率来 计算其酶活性。

自备仪器和用品： 可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰 和蒸馏水。

操作步骤：

一、粗酶液提取： 称取约 0.2g 组织，剪碎，放入预冷的研钵中，加入 1.0 mL 提取液进行冰浴匀浆，12000g，4℃， 离心 10min，取上清，置冰上待测。

二、测定步骤

1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 540nm，蒸馏水调零。

2、样本测定，（在 1.5mL EP 管中依次加入下列试剂）： （见说明书）

取 200μL 至微量石英比色皿或 96 孔板中， 540nm 处记录各管吸光值 A，如果吸光值大于 2， 可以用蒸馏水稀释后测定，ΔA=A 测定-A 对照。

β-1,3-GA 活性计算：

根据标准管吸光度（x）和浓度（y，mg/ml）建立标准曲线，将ΔA 带入公式中计算出样品中产 生的还原糖的含量 y 值（mg/ml）

（1） 按蛋白浓度计算 单位的定义：每 mg 组织蛋白每小时产生 1mg 还原糖定义为一个酶活性单位。 β-1,3-GA(U/mg prot)=(y×V1)÷(V1×Cpr)=y ÷Cpr

（2） 按样本鲜重计算 单位的定义：每 g 组织每小时产生 1mg 还原糖定义为一个酶活性单位。 β-1,3-GA(U /g 鲜重)=(y×V1)÷(W×V1÷V2)=y ÷W

(3) 按细菌或细胞密度计算 单位的定义：每 1 万个细胞或细菌每小时产生 1mg 还原糖定义为一个酶活性单位。 β-1,3-GA(U /g 鲜重)=( y×V1)÷(500×V1÷V2)=0.002×y V1：加入反应体系中样本体积，0.035mL；V2：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度， mg/mL；W：样本鲜重g。

β-1,3葡聚糖酶(β-1,3-GA)检测试剂盒原来可以检测植物样本