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测定意义：

LPS又称甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和单酯）。LPS广泛的存在于各种生物中。血清中LPS的异常增高常见于胰腺炎和胰腺癌。

测定原理：

LPS催化油酯水解成脂肪酸，利用铜皂法测定脂肪酸生成速率，即可计算LPS活性。

自备仪器和用品：

研钵、台式离心机、震荡混匀器、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、可调式移液枪、甲苯、无水乙醇、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制：

试剂一：液体×2瓶，4℃保存。

试剂二：液体×1瓶，室温保存。

试剂三：液体×1瓶，4℃保存。

标准品×1瓶，10 µmol/mL的标准溶液，室温保存。临用前加入3.168 mL无水乙醇，充分溶解。

粗酶液提取：

称取约0.1g样品，加试剂一1 mL充分研磨，16000rpm 4℃离心40min，取上清液待测。

LPS测定操作：

1. 分光光度计预热30 min以上，调节波长到710 nm，蒸馏水调零。

2. 试剂一和试剂二置于37℃水浴预热30min以上。

3. 空白管：取1.5 mL EP管，依次加入150μL试剂一和50μL试剂二，反复震荡混匀；加入5μL蒸馏水，迅速震荡混匀后置于37℃水浴准确反应10 min；加入400μL甲苯，反复震荡混匀后，室温4000rpm离心10min；取出离心管，小心吸取上层溶液200μL，加入另一1.5mL EP管，再加入50μL试剂三，反复震荡混匀；室温4000rpm离心10min，小心吸取上层溶液150μL，加入微量石英比色皿/96孔板，于710nm处测定吸光值。记为A空白管。

4. 标准管：取1.5 mL EP管，依次加入150μL试剂一和50μL试剂二，反复震荡混匀；加入5μL标准品，迅速震荡混匀后置于37℃水浴准确反应10min；加入400μL甲苯，反复震荡混匀后，室温4000rpm离心10min；取出离心管，小心吸取上层溶液200μL，加入另一1.5mL EP管，再加入50μL试剂三，反复震荡混匀；室温4000rpm离心10min，小心吸取上层溶液150μL，加入微量石英比色皿/96孔板，于710nm处测定吸光值。记为A标准管。

5. 测定管：取1.5mL EP管，依次加入150μL试剂一和50μL试剂二，反复震荡混匀；加入5μL上清液，迅速震荡混匀后置于37℃水浴准确反应10min；加入400μL甲苯，反复震荡混匀后，室温4000rpm离心10min；取出离心管，小心吸取上层溶液200μL，加入另一1.5mL EP管，再加入50 μL试剂三，反复震荡混匀；室温4000rpm离心10 min，小心吸取上层溶液150 μL，加入微量石英比色皿/96孔板，于710nm处测定吸光值。记为A测定管。

注意事项：

1、甲苯有毒，实验过程中需佩戴手套和口罩。

2、实验过程中须远离火源。

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