信帆生物欢乐知识大讲堂开课啦！石蜡切片常见问题解析

 信帆生物欢乐知识大讲堂开课啦！石蜡切片常见问题解析！

大家都清楚样本的制备是IHC实验成功的前提条件。样本完成石蜡包埋后，需要成约3-4um的薄片。本文主要介绍了切片小技巧及过程中容易出现的几种问题？

切片小技巧

① 组织切片，旧刀修片，新刀切片。

②切片厚度3-4μm（淋巴结、扁桃体、鼻咽、扁桃体2-3μm；脂肪5-6μm）

④切片动作轻，用力均匀。

⑥刀片锋利，切片角度5°佳，切片平整无褶皱和收缩。

⑧蜡块表面有钙点，应20%HCL表面泡1-2h，水洗后切。

切片光面朝下展片、捞片。

☞摊片水温利于展平又不熔化，必要时用20%酒精摊片。

☞细小组织（穿刺、内镜小标本）可以多贴几个。

☞在烘烤切片前应做好排水，烤片温度高于石蜡熔点5-10℃。

问题1 细胞皱缩和收缩；核“起泡”变大损伤；胶原染色嗜碱性

原因：石蜡温度过高。

解决方法：烤箱温度高于石蜡熔点5-10℃为佳。

问题2 切片卷成致密团

原因：①刀钝；②倾斜角太小；③切片太厚。

解决方法：①换新刀片；②如果间隙角充分，降低倾刀的斜度。

问题3 切片破碎或切不成片 

①组织固定、脱水、透明不*，浸蜡不透；浸蜡包埋温度过高或时间过久。

解决方法：①优化组织处理；②及时更换试剂；③重新脱水补救；或者重取。

 问题4  切片不连片

原因：刀刃不锋利，刀间隙角度大；蜡块内组织上下端留蜡边太少或不整齐，刀边碎片；室温过低或石蜡过硬。

移动刀口或更换刀片，检查刀的角度，清洁刀片和刀架背面；在低熔点的石蜡中重新包埋；提高室内温度或温暖蜡块表面（哈气等）；切片厚度适宜（根据组织类型）。

 问题5  组织切片不完整，缺损

①取材时未取中病灶，组织块太大，太厚；③组织块内组织不平坦；⑤切片时粗修过多（切削过深）或过少（没切到足够的深度）。

解决方法：②组织在包埋模中均匀铺平；④切片方向：软到硬，易到难，主到次。

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