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植物组织蔗糖(sucrose)含量检测原理!
蔗糖是植物光合作用的主要产物,也是糖分运输和储藏的主要形式。因此,测定蔗糖含量对于植物糖代谢具有重要意义。此外,蔗糖含量是饮料﹑蜂蜜、果脯﹑糖果和乳制品等产品质量控制的重要指标之一。
测定原理:
酸性条件下蔗糖水解生成葡萄糖和果糖,果糖进一步与间苯二酚反应,生成有色物质,在480nm下有特征吸收峰。
所需的仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
提取液:液体 100ml×1瓶,4℃保存;
试剂一:液体10mL×1瓶,4℃保存;
试剂二:液体5ml×1瓶,4℃保存;
试剂三:液体 40ml×1瓶,4℃保存;
试剂四:液体 10ml×1瓶,4℃保存;
试剂五:粉剂0.5g×1瓶,常温保存。
蔗糖提取:
称取约0.1g样本,常温研碎,加入1mL提取液,适当研磨后快速转移到离心管中,置于80℃水浴锅中10min,振荡3~5次,冷却后,离心取上清,加入2mg试剂五,80℃脱色30min,再加入1mL提取液,离心后取上清液测定。
测定操作表(在1.5mL EP管中依次加入下列试剂):
试剂(μL) | 空白管 | 标准管 | 测定管 |
样本 | 100 | ||
试剂一 | 100 | ||
蒸馏水 | 100 | ||
试剂二 | 50 | 50 | 50 |
混匀,100'C煮沸5min左右(盖紧,防止水分散失)
试剂三 | 700 | 700 | 700 |
试剂四 | 200 | 200 | 200 |
混匀,80℃水浴内反应10min左右,冷却后测定480nm处光吸收值,空白管、标准管和测定管分别记为A1、A2和A3。
蔗糖含量计算:
1、按照蛋白质含量计算
蔗糖含量(mg/mg prot )=1mg/mL ×(A3-A1)÷(A2-A1) ÷蛋白浓度mg/mL。
2、按照样品质量计算
蔗糖含量(mg/g鲜重)=1mg/mL ×(A3-A1)÷(A2-A1) ÷样品鲜重g/mL。
本产品仅供科研实验用,不做其它用途!