总抗氧化能力试剂盒说明书

总抗氧化能力（Total antioxidant capacity ，T-AOC）
试剂盒说明书
总抗氧化能力（Total antioxidant capacity ，T-AOC）
试剂盒说明书
可见分光光度法
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
可见分光光度法
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
测定对象中各种抗氧化物质和抗氧化酶等构成总抗氧化水平。在生物学、医学和药学研究
中常常检测血浆、血清、唾液、尿液等各种体液，细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液
及各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力。
测定原理
在酸性环境下，物质还原 Fe
3+ -三吡啶三吖嗪(Fe 3+ -TPTZ)产生蓝色的 Fe 2+ -TPTZ 的能力反映
了其总抗氧化能力。
自备实验用品
可见分光光度计、恒温水浴锅、低温离心机、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配制
提取液：液体 60mL×1 瓶，使用前预冷。
试剂一：液体 50mL×1 瓶，避光保存。
试剂二：液体 5mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体 5mL×1 瓶，避光保存。
样品的制备
(1) 血清、血浆、唾液或尿液样品
血浆（制备时可以使用肝素或柠檬酸钠抗凝，不宜使用 EDTA 抗凝）4℃，5000rpm 离心
10min，取上清待测。血清、唾液或尿液样品直接用于测定，也可以-80℃冻存（不宜超 30 d）
后再测定。
(2) 组织样品
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入
1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
(3) 细胞样品
按照细胞数量（10
4 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞
加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎（功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；10000g，
4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
操作步骤
混合液(现配现用)：将试剂一、试剂二、试剂三按 10:1:1 的比例混合，使用前预温至 37℃ 。
空白管 测定管
混合液（μL） 900 900
样品（μL） 30
双蒸水（μL） 120 90
充分混匀，反应 10min，双蒸水调零，1mL 玻璃比色皿，测定 593nm 处吸光值，△A= A 测定
-A 空白