丙酮酸激酶（PK）试剂盒的检测原理和试剂组成

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丙酮酸激酶（Pyruvatekinase，PK）试剂盒
一、 测定意义
丙酮酸激酶酶催化糖酵解过程中的zui后一步反应，是糖酵解过程中的主要限速酶之一，也是动植物组织中产生ATP的关键酶之一，因此测定动植物组织中PK的活性具有重要意义。
二、 测定原理
在二磷酸腺昔（ADP）存在的条件下丙酮酸激酶能够催化磷酸烯醇丙酮酸（PEP）转化成丙酮酸，丙酮酸与2, 4 -二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，后者在碱性溶液中显棕 红色，颜色深浅与丙酮酸浓度成正比，由此计算丙酮酸激酶活力。三、试验中所需的仪器和设备 可见分光光度计或酶标仪、37℃恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿或酶标板、蒸馏水
四、试剂的组成和配制
试剂一：粉剂×1瓶，常温保存，用时加入50mL双蒸水溶解，4℃保存3个月；试剂二：液体13 mL×1瓶，4℃保存3个月； 试剂三：粉剂×1支，常温保存；用时加1mL双蒸水充分溶解;试剂四：粉剂×1支，-20℃保存；用时加1.2 mL双蒸水充分溶解；试剂五：粉剂×1支，-20℃保存；用时加550μL双蒸水充分溶解；试剂六：2 mmol/L标准液母液1mL，-20℃保存1个月；试剂七：储备液15 mL，4℃避光保存3个月； 试剂八：终止试剂50 mL，4℃保存3 个月；
五、粗酶液的提取
准确称取组织重量，按重量体积比（g/mL）加9 倍试剂一，制成10%匀浆。8000g/min 离心10 min，取上清液待测，同时测定组织蛋白含量。

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