信帆生物提供甲基化分析服务

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DNA甲基化研究是表观遗传学的重要内容，真核生物中的甲基化仅发生于胞嘧啶，即在DNA甲基化转移酶的作用下使CpG二核苷酸5’-端的胞嘧啶转变为5’-甲基胞嘧啶。DNA甲基化通常抑制基因表达，去甲基化则诱导了基因的重新活化和表达。这种DNA修饰的方式在脊椎动物的胚胎发育过程中起着重要的调控作用，参与多种疾病包括各种肿瘤的发病机理，是目前表观遗传学研究的热点。

主要技术原理

用亚硫酸氢盐处理基因组DNA，则未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶，而发生甲基化的胞嘧啶不变。根据某一待测位点或者调查的某一区域序列设计引物进行PCR扩增，通过PCR电泳、测序、荧光定量及质谱等方法对扩增产物进行检测，根据检测结果分析哪些位点发生了甲基化及其甲基化的频率。

主要服务方案

1、甲基化特异性的PCR（Methylation-specific PCR，MSP）
   用亚硫酸氢盐处理基因组DNA，所有未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不变。设计针对某一待测位点的甲基化和非甲基化引物进行PCR扩增，通过电泳检测MSP扩增产物判定待测样本是否存在甲基化位点。

2、亚硫酸氢盐测序法（Bisulfite sequencing PCR，BSP）
   用亚硫酸氢盐处理基因组DNA，未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不变。针对要调查的区域设计BSP引物进行PCR扩增，对扩增产物进行测序就可以判断哪些CpG位点发生了甲基化；一般将PCR产物克隆后进行测序成功率会比较高。

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实验流程：

（1）BSP引物设计：针对感兴趣的基因区域进行BSP引物的设计（扩增产物不超过400bp）

（2）亚硫酸氢盐处理基因组DNA：提取基因组DNA并进行亚硫酸氢盐的转化

（3）PCR扩增目的片段：BSP引物扩增感兴趣的区域

（4）克隆到载体：将PCR产物纯化后连接到载体上

（5）克隆测序：挑取阳性菌斑，提取质粒并测序（通常测序5个或10个克隆）

（6）序列分析：对测序的结果进行比对和甲基化分析

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