关于Western Blot实验操作时候的一些注意事项

关于Western Blot实验操作时候的一些注意事项！

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常见问题如下：

1、煮好后的样品，若没有及时上样分离，应如何保存，可以保存多久?

2、有没有人在用bio-rad的小型垂直电泳槽，有没有操作手册?

3、湿式转移时是否必须要用bio-rad的滤纸?

4、恒压转移的条件如何确定，因为我要分离小至21KD，中至66KD，大致170KD的蛋白质，转移条件能够相同吗?

5、凝胶的浓度是不是可以用一个浓度?书上写不同的凝胶浓度分离的分子量范围不同，还给出了一个线形范围，是不是不在这个范围内也能分离，只是就不是线性范围了?

6、电泳用的是恒流，一块胶，20mA，100分钟左右。转膜也是恒流，38mA，100分钟。而且我用别人的细胞和一抗在我的整个反应体系下做出来了，当然彼此的目的蛋白不同。所以，我想问题应该出在抗原和一抗上，不知对不对。

关于Western Blot实验操作时候的一些注意事项！

解答：

1、煮好后的样品，放到-20，我们在一个月后此样品，效果一样。

2、bio-rad的小型垂直电泳槽的操作手册在他们的主页Bio-Rad USA上有。

3、转移时一般的WATERMEN滤纸就可以。

4、转移条件是和蛋白质大小有关的：以次确定电压和时间。具体可让ptglab帮你定夺。

5、凝胶的浓度也是和分离蛋白质大小有关。不是随心所欲选的，否则分离效果可能不是你所期望的。

6、电泳的条件：样品的分子量决定了胶的浓度，一般使样品跑至胶的中部即可。正常条件下，电泳时溴酚蓝和10kd左右蛋白跑在一起。由此可以决定电泳的电压和时间。建议你用恒压80-100伏。

关于Western Blot实验操作时候的一些注意事项！