信帆生物组织学习了T2毒素ELISA试剂盒检测流程

信帆生物组织学习了T2毒素ELISA试剂盒检测流程

信帆生物本月组织学习了T2毒素ELISA试剂盒操作流程，让公司员工对该试剂盒有了一个全新的认识，对检测步骤和方法也有了更加深入的了解，对于大家来说对以后的组织开展工作都有了一个提高，让大家都对产品更加清楚明了。

下面我们跟着信帆生物一起来了解一下今天的学习内容吧！

T-2 毒素（T-2 Toxin）ELISA 检测试剂盒

【概要】T-2 毒素是一类单端孢霉烯族真菌毒素（trichothecenes）中一个具有代表性的毒素。这类真菌广泛地生存于土壤、植物和其他基质上，侵染麦类、玉米等田间作物，除使谷物减产外，还能生有毒物质，人畜食后，可引起中毒。现在主要有薄层、气相、高压液相、质谱等方法。酶免检测分析方法具有方法稳定、试剂便于保存、灵敏度高的优点，成为重要的定性定量的分析方法之一。
【适用范围】
本试剂盒可定性、定量检测玉米、玉米粉、玉米胚芽及其制品和饲料中的T-2 毒素。
【试验原理】
本试剂盒采用间接竞争ELISA 方法，在酶标板微孔条上预包被T-2 毒素抗原，样本中T-2 毒素和此抗原竞争结合抗T-2 毒素抗体（抗试剂），同时抗T-2 毒素抗体与酶标二抗（酶标物）相结合，经TMB 底物显色，样本吸光值与其所含T-2毒素的含量成负相关，对照标准曲线，再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中T-2 毒素的含量。
【试剂盒组成】
1. 96 孔板（8 孔*12 条）
2. T-2 毒素标准溶液×6 瓶：（1.5mL/瓶）
0 ng/mL,2.5 ng/mL, 5 ng/mL，10ng/mL,20 ng/mL,40 ng/mL
3. T-2 毒素酶标物1 瓶.....................................................6mL
4. T-2 毒素抗试剂1 瓶....................................................6mL
5. 底物液1 瓶.....................................................................6mL
6. 显色液1 瓶.....................................................................6mL
7. 终止液1 瓶....................................................................6mL
8. 浓缩洗涤液（20×）1 瓶......................................... 20mL
9. 反应板支架..................................................................1 块
注：48 孔型号试剂盒内容物数量、体积略有差别。
【需要而未提供的设备和试剂】
----酶标仪450nm
----振荡器
----离心机
----粉碎机
----天平：感量0.01g
----微量移液器：单道20L～200L、100L～1000L
----甲醇
----去离子水
注：以上仪器均可代购
【试剂配制】
洗涤工作液： 将浓缩洗涤液用去离子水按1:19 体积比进行稀释（1 份浓缩洗涤液+19 份去离子水）。70%甲醇水：取无水甲醇，用去离子水按7:3 体积比例稀释（7份无水甲醇＋3 份水）。
【样本前处理步骤】
玉米及其制品、饲料原料及成品（稀释倍数：28）
1. 取5.0g 粉碎好的样品，加入20mL 70%甲醇水，混匀；
2. 充分振荡15min 后过滤或4000rpm 离心5-10min；
3. 将滤液或上清液用去离子水以1:6 稀释（例：0.5mL 滤液+3mL 去离子水），充分混匀后即为待测样液；
4. 稀释后的待测样液需pH 值约7.0 左右，移取该液50uL进行检测。
注意：若样品中T-2 毒素偏高，建议将样品提取液用10%甲醇-水再进一步稀释后检测。
【检测步骤】
一、测定前须知：
1. 使用之前将所有试剂和所需板条回温（20～25℃）。
2. 使用之后立即将所有试剂及剩余板条放置2～8℃。
3. ELISA 分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性，正确的洗板操作是ELISA 操作中的要点。
4. 在所有恒温孵育过程中，避免光线照射，可用盖板膜盖住微孔板。
二、操作步骤：
1. 将所需试剂及微孔板取出，放置室温（20~25℃）30min以上，液体试剂使用前均须摇匀。
2. 取出所需数量的微孔板，将不用的微孔板放回铝箔袋中，放置于2~8℃冷藏。不可冷冻。
3. 配置好的洗涤工作液在使用前也需回温。
4. 将样本和标准品对应微孔编号，建议每个样本和标准品做2 孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。
5. 每孔加入250μL 左右洗涤液，洗涤液不得溢出，放置40s左右，甩掉洗涤液，在吸水纸上拍干。
6. 分别加入标准溶液/待测样液50L 到对应的微孔中，再加入酶标物50L/孔，后加入抗试50L/孔，轻轻震荡混匀，遮盖后37℃恒温培养箱中反应30min。
7. 小心揭开盖板，甩掉反应液，加入洗涤液250μL/孔充分洗涤5 次，每次间隔40s，用吸水纸拍干。
8. 每孔分别加入底物液和显色液各50μL，轻轻震荡混匀，遮盖后37℃恒温培养箱中显色15min。
9. 加入终止液50L/孔，轻轻震荡混匀，设酶标仪于450nm处读取每孔OD 值。(若无酶标仪，则不加终止用目测法可进行判定)。
【结果判定】
标准曲线的绘制与计算用酶标仪测得每孔的光密度值(A)，绘制标准曲线。通过准曲线，可准确定量样品中T-2 毒素含量。标准曲线：横坐标为T-2 毒素标准浓度的对数，纵坐标为百分比（即各标准品孔和样品孔光密度值除以0 ng/mL 标准液孔光密度值(A0)再乘以%所得，光密度值(标准孔或样品孔) ／光密度值(A0)×%=％(纵坐标)）。相应每个样品的T-2 毒素浓度可从曲线上获得。欢迎索取专门的数据处理

软件进行计算。
备注：试剂盒初筛后，若出现阳性结果，建议用仲裁法进一步确证。
【注意事项】
1. 试剂及样本没有恢复到室温（20~25℃）会导致所有标准的OD 值偏低。
2. 在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
3. 每种试剂使用前均需摇匀。
4. 反应终止液为2M 硫酸，避免接触皮肤。
5. 不要使用过了有效期的试剂盒；也不要掺杂使用过了有效期的试剂盒；不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
6. 储存条件：试剂盒保存于2~8℃，不能冷冻，将不用的微孔板重新真空密封。标准物质和无色的显色剂对光敏感，因此要避光保存。
7. 试剂变质的迹象：显色试剂有任何颜色表明显色剂变质，应当弃之。0 标准的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）时，表示试剂可能变质。
8. 对玻璃器皿和T-2 毒素溶液消毒好用次氯酸钠（10%，v/v）溶液浸泡过夜。
【贮藏条件及保存期】
贮藏条件：保存试剂盒于2～8℃。
保存期：该产品有效期为6 个月。生物试剂日期见包装盒。
 

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