基质金属蛋白酶（MMP2/9）明胶酶谱法试剂盒。试剂盒Z大可以检测750个样本，试剂盒反映灵敏，上样量小。全程提供技术指导，咨询。

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上海信帆科技有限公司供应供应MMP-2 ，MMP-9活性检测试剂盒（明胶酶谱法）试剂盒，明胶酶谱法试剂盒*，MMP-2/9基质金属蛋白酶试剂盒供应。

基质金属蛋白酶(MMP2/9)明胶酶谱法试剂盒

MMP-2 and MMP-9明胶酶谱法试剂盒

描述：基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase, MMP）以无活性的酶原形式分泌，活化后能够降解

细胞外基质的胶原蛋白，又称胶原酶。通过影响细胞外基质，胶原酶参与胚胎发育、形态发生、组

织重塑等过程，并参与炎症、肿瘤、、神经等许多疾病过程。血浆与组织中的MMP-2、MMP-9

参与各种生理与病理过程，其在诊断和治疗中的意义日益受到重视1。

本试剂盒采用酶谱法（zymography）检测MMP-2、MMP-9 活性。Zymography 是一种广为使用的、基

于SDS-PAGE 电泳和反相凝胶染色的蛋白酶检测方法，其灵敏度可达1 nM，高于ELISA 方法2，其

基本原理和程序是：制备加有胶原酶底物的SDS-PAGE 凝胶，含蛋白酶的样品在此凝胶中进行电

泳， 电泳结束后取出凝胶与酶反应Buffer 孵育，凝胶染色与脱色。凝胶中由于含底物蛋白而被深

染，形成深色背景，但在有蛋白酶条带的位置，蛋白酶将降解凝胶中的底物蛋白，因而不被染色

而形成透亮区域，从而能同时指示MMP-2、MMP-9 的大小位置（酶谱）及活性。本试剂盒提供

MMP-2、MMP-9 特异蛋白底物及酶学反应缓冲液，可检测少至0.1~0.5 μl 血液中的MMP-2、MMP-

9 酶谱及活性，检测灵敏度~1 nM。试剂盒可进行50 次标准小胶检测，如果小胶加样孔为10~15

个，则总计可检测500~750 个样品。

适用: 检测MMP-2、MMP-9 酶谱及活性（Detect MMP2 and MMP9 as low as 1

nM）。组成与储存（50 assays）：

1. 2 × SDS-PAGE non-reducing buffer  20 oC；

2. 10 × Substrate G,20 oC；

3. 10 × Buffer A,  4 oC, 使用时用蒸馏水稀释；

4. 10 × Buffer B, 4 oC, 使用时用蒸馏水稀释；

5. 考马斯亮蓝染色液, 4 oC。

基质金属蛋白酶（MMP2/9）明胶酶谱法试剂盒

检测步骤：

1. 制备含MMP 底物蛋白的SDS-PAGE 凝胶：分离胶浓度为8%。按照标准程序制备SDSPAGE

凝胶。将10 × substrate G 融化，并90 oC 加热5 分钟。分别在浓缩胶和分离胶中额外加

入10 × substrate G 并使之稀释10 倍，混匀后加入过硫酸铵和TEMED，等待凝胶聚合。

2. 待测样品1:1 稀释于2 × SDS-PAGE non-reducing buffer （用完后可自行配制：4% SDS, 100 mM

Tris-Cl pH6.8, 20% glycerol, 0.02% bromophnol blue），混合后直接上样。切勿加热变性，并且仅

使用不加还原剂的上样缓冲液。可通过预试验确定加样量，使用普通蛋白预染Marker 即可。阳

性对照（可选步骤）：可取人、小鼠、大鼠或兔100μl 全血与100μl 2 × SDS-PAGE nonreducing

buffer 等体积混合，取5-15μl 上样。

3. 低电流恒流电泳，每一块小胶电流为20 mA/gel。溴酚蓝跑出凝胶前沿时结束电泳。

4. 洗涤凝胶：取出凝胶，去除浓缩胶，放入容器内。可先用适量蒸馏水冲洗凝胶，然后加入10 ml

1× Buffer A（用蒸馏水稀释），室温漂洗凝胶2 × 30 分钟。中间换液。

5. 孵育：倒掉Buffer A。加入10 ml 1× Buffer B（蒸馏水稀释），室温或37oC 孵育1~5 小时。阳性

对照或者血中的MMP 通常37oC 孵育1 小时即可显示。如MMP 活性低，应延长孵育时间为

10 小时或过夜。

6. 显色：倒掉Buffer B，加入SDS-PAGE 凝胶蛋白质考马斯亮蓝染色液（操作步骤见SDS-PAGE

凝胶蛋白质考马斯亮蓝染色液说明书）。凝胶的大部分区域被深染，在有MMP 条带的位置

不被染色而形成透亮区域。透明区域的位置和范围指示MMP-2、MMP-9 的大小位置（酶谱）及

活性。阳性对照将在66~72 （MMP-2）、92 （MMP-9）、130 （proMMP-9）、225 （proMMP-9） kDa

位置出现透明条带。

7. 条带扫描：将凝胶放在扫描仪上扫描。虽然MMP 条带透明，但凝胶背景并非真正全黑。解决

办法：可用非透射光扫描，或用软件图像处理程序调整背景显示为灰度显示，并尽量设置为黑

色。MMP 条带则为白色，这种背景黑条带白的格式是英文论文中zui常见的格式。

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基质金属蛋白酶(MMP2/9)明胶酶谱法试剂盒