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硫酸酯-交联纤维素

硫酸酯-交联纤维素
NuPearla Sulfate是纤维素微球直接硫酸酯化后形成的亲和层析分离介质。与琼脂糖相比,纤维素微球的原料有标准牌号,纤维素骨架不含阴离子基团,纤维素微球的非特异性吸附是琼脂糖微球的1/10~1/3,例如本产品的纤维素基球对细胞色素C的非特异性吸附量可低至2 μg/mL。
本产品仅供科研实验用,不做其他用途。

产品型号:

更新时间:2025-02-07

硫酸酯-交联纤维素

、产品介绍

NuPearla Sulfate是纤维素微球直接硫酸酯化后形成的亲和层析分离介质。与琼脂糖相比,纤维素微球的原料有标准牌号,纤维素骨架不含阴离子基团,纤维素微球的非特异性吸附是琼脂糖微球的1/10~1/3,例如本产品的纤维素基球对细胞色素C的非特异性吸附量可低至2 μg/mL。经过硫酸酯化后,NuPearla Sulfate对多种活病毒、灭活的或结构分裂的病毒、病毒或微生物抗原和肝素结合蛋白具有亲和力。

同时,硫酸酯是一种优良的耐盐型阳离子交换配基,NuPearla Sulfate也可作为阳离子交换填料,对溶菌-酶的结合量可达180 mg/mL,且在50~200 mM NaCl盐浓度下仍结合良好。

 、产品特点与技术指标

产品名称

硫酸酯-交联纤维素

基质

高度交联纤维素

配基

硫酸酯,160~200 μmol H+/mL

粒径范围 a

45~165 μm

平均粒径

~90 μm

溶菌-酶结合载量

120 mg/mL

推荐工作流速

60~150 cm/h

流速与压力 b

>300 cm/h 0.3 MPa

使用 pH

4~8.5(推荐的工作 pH),3~12(长期稳定);2~14(短期稳定)

化学稳定性

在以下溶液中稳定:常用的水相缓冲液、0.5 mol/L 氢氧化钠等

储存与运输

20%乙醇,2~30 ℃

注:a90%体积以上的微球在此粒径范围;b 10 cm 柱高下的测试流速。

、使用方法参考

3.1  色谱柱装填

以下阐述与层析系统连接时,填料的色谱柱装填方法。

(1)所有需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一样,液体做脱气处理。

(2)填料用量计算:通过沉降定量填料体积,需要的沉降填料体积=柱体积×压缩比(也称压缩因子)。沉降体积是指填料在 20%乙醇保存液中自然沉降完-全读取的稳定 体积。NuPearla Sulfate 的压缩比为 1.15。为使达到装柱比,可通过柱头下压的方法,也可以通过高流速压柱。

(3)填料清洗:将填料悬液充分摇匀后量取相应体积,抽滤除去液体,并用约3倍填料体积的纯化水洗涤,重复3次,以除去保存液。

(4)装柱填料悬液准备:将填料转移到适当的容器中,加入适量的装柱液,制成50~75 v%的装柱填料悬液,使用前搅匀。

(5)装填前准备:在清洗干净的层析柱下端加入装柱液,以除去下垫片及层析柱下端的空气,在柱内保留少量的装柱液,拧紧下堵头,调整柱子使其垂直于地面。

(6)装填:将搅匀后的填料悬液一次性缓慢倒入层析柱内(必要时使用装柱器),为避免引入气泡,应使之沿层析柱内壁自然流下。将所有填料加入后,用装柱液将装柱器加满,拧紧装柱器上盖,将柱子与层析系统连接。

(7)压柱:使柱内填料自然沉降(或50~150 cm/h 的低流速下沉降),待填料沉降完-全后(填料与液体的界面清晰),去除装柱器,装上上柱头,并将柱头下降至界面处;通过高流速(推荐流速见下表,注意柱压不超过0.3MPa),继续压柱至界面清晰稳定,标记界面稳定时的柱高。停泵,打开柱头上的阀门/堵头,关闭柱底的阀门/堵头,下压柱头至标记位置下方与压缩比对应的位置,旋紧柱头,装柱完成。装柱完成后,需用高流速平衡柱内的填料。 

 

装柱条件

NuPearla Sulfate

压缩比

1.15

装柱流速

150~300 cm/h

 

3.2  柱效测定和评价

完成装柱后、使用前可通过柱效测定和评价可以确认层析柱装填质量。柱效通常用 理论塔板高度(HETP)和非对称因子(As)来评价。

 

3.3  平衡与上样(Equilibration & Loading

在上样前,可用初始缓冲液A在操作流速下平衡层析柱,观察检测器的变化,直到电导、pH 等参数不变。根据应用不同,本产品的缓冲液体系可为磷酸盐、柠檬酸盐和Tris-HCl等,pH4~9居多,例如10 mM PB +50~150 mM NaClpH7.5

 

3.4  洗脱(Elution

洗脱过程则可以进一步提高缓冲液A中的盐浓度,添加0.5~2 MNaCl可将目的蛋白有效洗脱。在前期工艺筛选时建议用线性梯度洗脱以确定合适的洗脱浓度,在工艺优化和确定时建议用阶跃梯度洗脱,以节省洗脱液体积和提高效率。

 

3.5  再生(Regeneration)和在位清洗(CIP

通常上述的再生过程可将填料彻-底清洗。若发生柱压升高,或为了避免交叉污染,可采用以下溶剂进行再生与在位清洗:1~2mol/L NaCl0.5mol/L NaOH70%乙醇或30%异丙醇等。在位清洗可有效去除介质上的杂质,反向效果更佳。清洗后需用3~5 柱体积的纯水除去上述溶剂。

3.6  填料保存

填料的初始保存液为20%乙醇,使用过后可继续用20%乙醇保存。保存温度在2~30 ℃为宜,不可冻存。


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