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铜锌超氧化物歧化酶(CuZn-SOD)实验代测
测定原理:后者氧化羟胺形成通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子自由基(O2ˉ),亚硝酸盐,在显色剂的作用下呈现紫红色,用可见光分光度计测其吸光度,当被测样品中含SOD时,则对超氧阴离子自由基有专一性的抑制作用,使形成的亚硝酸盐减少,比色时测定管的吸光度值低于对照管的吸光度值,通过公式计算可求出被测样品中的SOD活力。
植物体中SOD可分为3种类型:即铜锌SOD( CuZn-SOD)锰SOD( Mn-SOD)和铁SOD( Fe-SOD)。低等植物以 Fe-SOD和Mn-SOD为主,高等植物以CuZn-SOD为主,CuZn-SOD主要位于细胞质和叶绿体中, Mn-SOD主要位于线粒体,FcoD一般位于一些植物的叶绿体中。三者相加等于总SOD(TOD)。经样本前处理过的样本中Mn-SOD和Fe-SOD活力丧失,但 CuZn-SOD活力不变。
SOD 属于金属酶,按照结合金属离子种类不同,该酶有以下三种:含铜与锌超氧化物歧化酶( CUZNSOD )、含锰超氧化物歧化酶( MN —— SOD )和含铁超氧化物歧化酶( Fe —— SOD )。
三种 SOD 都催化超氧化物阴离子自由基歧化生成过氧化氢与氧气。螺旋藻蛋白质同时含有多种重要的酶,其中为重要的是超氧化物歧化酶,即SOD。
植物体中SOD可分为3 种类型:即铜锌-SOD(CuZn-SOD)、锰-SOD(Mn-SOD)和铁-SOD(Fe-SOD)。低等植物以Fe-SOD 和Mn-SOD 为主,高等植物以CuZn-SOD为主,CuZn-SOD主要位于细胞质和叶绿体中,Mn-SOD主要位于线粒体中,Fe-SOD一般位于一些植物的叶绿体中。三者相加等于总SOD(T-SOD)。经样本前处理过的样本中Mn-SOD和Fe-SOD活力丧失,但CuZn-SOD活力不变。产品优点如下:
1、快速简便:全程约50分钟,可测100例左右样本。
2、灵敏度高:IC50=0.05g/ml,是邻苯三酚法的18倍。
3、稳定性好:试剂盒2~8℃存放6个月有效。
4、再现性好:变异系数CV=1.7%。
5、回收试验: X =103.3%。
6、受外界影响因素小:干扰因素少,重复性强。
所需自备仪器和试剂: 1、分光光度计/酶标仪/半自动生化分析仪(比色测定波长为550nm)
2、恒温水浴箱或气浴箱 (孵育温度为37℃)
3、台式离心机
4、漩涡混匀器
5、微量移液器6、冰乙酸(AR级 乙酸含量99%以上)
铜锌超氧化物歧化酶(CuZn-SOD)实验代测