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γ-谷氨酰半胱氨酸连接酶(GCL)实验代测

  • 型   号:(GCL)
  • 价   格:25

GCL是GSH合成的限速酶,GSH对GCL有反馈抑制作用。
γ-谷氨酰半胱氨酸连接酶(GCL)实验代测

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γ-谷氨酰半胱氨酸连接酶(GCL)实验代测

检测意义:GCL是GSH合成的限速酶,GSH对GCL有反馈抑制作用。GCL基因表达受多种因素调节,如氧化剂、抗氧化剂、生长因子和炎症因子等。GCL活性高低对GSH含量和GSH/GSSG比值有重要影响。
检测原理:在ATP和Mg2+存在下,GCL催化谷氨酸和半胱氨酸合成γ-谷氨酰半胱氨酸;同时ATP去磷酸化产生无机磷分子,通过测定无机磷增加速率,即可计算出GCL活性。
自备仪器及用品:冷冻离心机、水浴锅、移液器、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、浓硫酸和蒸馏水。
试剂组成及配置:试剂一:液体×1 瓶,4℃保存。 
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加6mL蒸馏水充分震荡溶解。 
试剂三:粉剂×1 管,4℃保存。临用前加入蒸馏水1.5mL充分震荡溶解。 试剂四:液体×1 瓶,室温保存。 试剂五:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加入12 mL蒸馏水,充分震荡溶解后,缓缓加入400µL
浓硫酸(自备),边加边搅拌。
粗酶液提取: 
1. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加
入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心10min,取上清,置冰上待测。 
2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500
万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。血清等液体:直接测定。

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