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His(6xHis-6C1)单抗

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His(6xHis-6C1)单抗,His标签单抗又叫6×His标签单抗,或6×His单克隆抗体,用小鼠制备,HIS可被镍柱吸附,用于纯化重组蛋白。

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 His(6xHis-6C1)单抗,His标签单抗又叫6×His标签单抗,或6×His单克隆抗体,用小鼠制备,HIS可被镍柱吸附,用于纯化重组蛋白。

His单抗

6xHis-6C1

mAb

mouse

/

EIAWB

 

Ni IDA Beads 可以用于各种表达来源(如大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞) 的组氨酸标签(6xHis-tagged)蛋白的纯化。它是以 4%琼脂糖凝胶为基质

6xHis 标签,也称为多组氨酸标签, His6 标签或 hexa 组氨酸标签, 是一种在转染的细胞中目标蛋白的 C 端或 N 端上由至少 6 个组氨酸残基链接上所组成的氨基酸序列。这种标签通常在重组蛋白的纯化中使用,这是因为组氨酸残基的序列可以在特定的缓冲液条件下结合到几种类型固定的离子上(比如镍,钴和铜)从而达到容易检测和纯化 His 标签蛋白的目的。
由于它的相对小的分子量,低的免疫原性,亲水性和在去污剂和其他添加剂存在的情况下的易变性, 因此在天然和变性的条件下,多组氨酸标签是被公认为广泛使用的亲和标签用于一系列的蛋白纯化目的。
除此之外,它可以检测和纯化重组蛋白而无需使用蛋白特异性的抗体或探针,同时抗 His 标签抗体的存在用于 His 标签蛋白的检测中使 6xHis 标签更加的普遍和受欢迎。
亲和纯化蛋白
在大肠杆菌和其他原核系统中表达的多组氨酸标签重组蛋白通常使用固定的金属离子亲和色谱来纯化或称为 IMAC. 在这个过程中,支撑物 (通常是珠状琼脂糖凝胶或磁珠颗粒) 用合适的耦合试剂来进行衍生,比如氨三乙酸 nitrilotriacetic acid (NTA) 或亚氨乙酸 iminodiacetic acid (IDA).
这些螯合的基团会固定所需要的二价金属离子 (比如镍,铜,钴和锌),从而这些金属离子负责结合和分离混合液蛋白中的目标分子。在选择使用哪个配基上,你需要考虑 IMAC 树脂的结合能力主要取决于被纯化蛋白的性质和在纯化过程中所使用的金属离子。
注意:需要更加深入完整的了解如何选择的螯合试剂来达到我的目的,请参考我们之前发的一篇文章,- -「对于 NTA 和 IDA 配基你需要知道哪些」。
镍,钴,铜是进行纯化 His 标签蛋白的被广泛使用的离子,由于他们在水溶液中对于组氨酸和半胱氨酸良好的亲和性。在这三个离子中,镍是泛使用的金属离子,它呈现出的亲和性和选择性对于 His 标签蛋白. 然而,它也会非特异性的结合包含组氨酸群的内源蛋白。
从另一个侧面讲,钴提供特异性的结合和组氨酸标签因此当纯度是首要选择时钴是二价阳离子的选。
铜离子和镍钴离子相比和 His 标签蛋白的结合非常强劲,但是它的特异性在三种离子中是弱的。由于这个原因,当纯度不是主要的目的时铜离子 IMAC 被使用。

 His(6xHis-6C1)单抗

 

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