线粒体和胞浆蛋白制备试剂盒

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线粒体和胞浆蛋白制备试剂盒

线粒体参与能量代谢过程，参与细胞凋亡与老化等信号转导过程，参与退行性疾病如帕金森氏病，肿瘤等病理过程。线粒体/胞浆分离试剂盒 （Mitochondria Isolation Kit）用于从组织或培养细胞中分离线粒体和胞浆成分。加入缓冲液匀浆破碎组织或培养细胞，经过数次800g和12000g离心，在60分钟内即可分离出完整的线粒体和胞浆成分。用于Western Blot、2D-胶、ELISA、酶学测定、线粒体蛋白或DNA提取、蛋白质组学等研究。

制备程序：
1. a. 组织匀浆：称取50-200 mg新鲜组织如肝脏、脑、心肌等，PBS冲洗，用剪刀剪为0.5cm2碎块放入小容量玻璃匀浆器内。估计组织块总体积。加入1.5 ml冰预冷的Mito-Cyto Buffer。上下研磨组织20次。
b. 培养细胞匀浆：消化细胞，PBS洗涤，800 × g 5~10 min离心收集细胞。计数。每次提取需要5 × 107个细胞。加入1.5 ml冰预冷的Mito-Cyto Buffer重悬细胞，将细胞悬液转移到小容量玻璃匀浆器内。用间隙严密的研杵研磨细胞30-40次。

2. 将组织或细胞匀浆物转移到离心管。800 × g 离心5 min 4 ºC。细胞核、大的膜碎片、未裂解细胞等在管底。

3. 收集上清液并转移到新的离心管。800 × g 离心5 min at 4 ºC。弃沉淀

4. 将上清液转移到新的离心管。12,000 × g 离心10 min 4 ºC。离心后的上清含胞浆成分，将上清转移到新离心管。线粒体沉淀在管底。

5. 洗涤线粒体：清除管内壁粘连的液体和碎片，加入0.2 ml Mito-Cyto Buffer重悬线粒体沉淀，12,000 × g 离心10 min 4 ºC。弃上清。

6. 用Mito-Cyto Buffer或合适的反应缓冲液重悬线粒体沉淀，50 µl/每100 mg组织，100 µl/5 × 10⁷个细胞。测定蛋白浓度。立即使用或−70 ºC保存。

 

线粒体和胞浆蛋白制备试剂盒