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胶立染(考马斯亮蓝染色液替代品)

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胶立染(考马斯亮蓝染色液替代品)
考马斯亮蓝染色是用考马斯亮蓝进行蛋白质染色的方法。考马斯亮蓝是一种阴离子染料, 常用考马斯亮蓝G250和R250。考马斯亮蓝 G250在游离状态下呈红色,当它与蛋白质 通过疏水结合后变为蓝色,蛋白质-色素结 合物在595nm波长下有较大光吸收。其光 吸收值与蛋白质含量成正比,因此可用于蛋白质的定量测定。

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胶立染(考马斯亮蓝染色液替代品)

考马斯亮蓝有G-250和R-250两种。

游离状态的考马斯亮蓝G250 在酸性溶液中呈红褐色,与蛋白质结合后呈蓝色,蛋白质含量与颜色的深浅成正比,经595nm 测定,可作出蛋白质含量与吸光度值的标准曲线,并求出未知样品的蛋白质浓度。

 蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡,完成反应十分迅速;其结合物在室温下1h内保持稳定。该法是1976年Bradford建立,试剂配制简单,操作简便快捷,反应非常灵敏,灵敏度比Lowry法还高4倍,可测定微克级蛋白质含量,测定蛋白质浓度范围为0~1 000μg/mL,是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。

考马斯亮蓝有G-250和R-250两种。其中考马斯亮蓝G-250由于与蛋白质的结合反应十分迅速,常用来作为蛋白质含量的测定。考马斯亮蓝R-250与蛋白质反应虽然比较缓慢,但是可以被洗脱下去,所以可以用来对电泳条带染色。

该方法用于大多数蛋白质的定量是比较精确的,但不适用于小分子碱性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污剂的浓度超过0.2%影响测定结果,如TritonX-100、SDS、NP-40等。常用于细胞骨架的检验。

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