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活性氧ROS检测试剂盒(绿色荧光)

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活性氧ROS检测试剂盒(绿色荧光)
活性氧包括超氧自由基(O2•−)、过氧化氢(H2O2)、羟基自由基(•OH)、过氧亚硝基(ONOO−)、一氧化氮(•NO)等,它们参与了细胞增殖生长、发育分化、衰老和凋亡等许多生理和病理过程。 试剂盒采用DCFH-DA (2,7-dichlorofluorescin diacetate)探针方法,是迄今用的较、较灵敏的细胞内活性氧检测探针。DCFH-DA没有

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活性氧ROS检测试剂盒(绿色荧光)

1. 本试剂盒特别适用于贴壁细胞和悬浮细胞活性氧的检测。对于动物组织样本而言,应尽量选择新鲜组织,匀浆操作应尽量快速,以减少实验误差,如果样本已经冻存,则无法保证检测结果的可靠性。

2. DCFH-DA可稀释于培养基或缓冲液中。血清或培养基的颜色并不会影响DCFH-DA及细胞内荧光的产生,但可能会影响荧光显微镜观察,干扰荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪的荧光测定。如果用上述仪器进行测定时,可将DCFH-DA稀释于无酚红培养基或适宜的缓冲液如PBS中。

3. 加入DCFH-DA的时机和孵育时间,以至能顺利检测细胞内活性氧为目的。当细胞药物处理时间较短(如<2 小时)或预计ROS效应较弱时,可将DCFH-DA在药物处理之前或者与药物同时加入到细胞培养基中;反之,当药物处理时间较长(如>6小时)或预计产生ROS效应较强时,可将DCFH-DA在药物处理之后再加入。

4. 活性氧供体内含高纯度12 mM 的H2O2。加入细胞后可使DCFH-DA氧化为DCF呈现强绿色荧光。推荐该试剂的细胞工作浓度为20-100 µM或更低浓度,当其浓度超过200µM时,将产生细胞毒性。如果用户熟悉ROS荧光或实验没有必要采用阳性对照,可以不加该试剂。一般情况下,活性氧供体加入到细胞30min左右即可产生明显的绿色荧光。

 

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