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组织细胞总抗氧化能力检测试剂盒(ABTS法)

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组织细胞总抗氧化能力检测试剂盒(ABTS法)即Total Antioxidant Capacity Assay Kit with ABTS Method是一种灵敏简单的检测总抗氧化能力(Total Antioxidant Capacity,TAOC)的试剂盒。机体中存在多种抗氧化物,包括抗氧化大分子、酶和抗氧化小分子等,可以清除体内产生的各种活性氧,以阻止活性氧诱导的氧化应激(Oxidative

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组织细胞总抗氧化能力检测试剂盒(ABTS法)

细胞样品的准备:收集新鲜细胞(如果是贴壁细胞,请用细胞刮刮下,不宜使用胰酶和EDTA消化),PBS洗涤细胞一次,离心收集细胞,吸尽上清。加入200μl预冷的组织细胞裂解液,超声破碎细胞释放其中的抗氧化物。4℃,10000g离心10分钟。取上清用于总抗氧化能力的测定。不立即测定的样品可以-70℃保存。如果样品中总抗氧化能力超出测定范围,可利用组织细胞裂解液适当稀释后测定,稀释倍数请通过预实验确定。

 组织样品的准备:取20mg组织,加入400μl的预冷的组织细胞裂解液,用匀浆器冰浴匀浆。4℃,10000g离心10分钟。取上清用于总抗氧化能力的测定。不立即测定的样品可以-70℃保存。如果样品中总抗氧化能力超出测定范围,可利用组织细胞裂解液适当稀释后测定,稀释倍数请通过预实验确定。  

总抗氧化能力检测工作液的配制:按比例混合ABTS溶液和氧化剂溶液,室温避光放置6小时;然后利用PBS稀释30-50倍,测定A734nm,根据吸光度值调整稀释倍数,至吸光度A734nm为0.7±0.05,即为总抗氧化能力检测工作液。

利用标准品浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标制作Trolox抗氧化能力标准曲线,并获得横纵坐标之间的函数关系式,然后利用各样品的吸光度值计算样品的总抗氧化能力。对于细胞和组织样品,可以根据样品中蛋白浓度测定,计算每毫克蛋白中总抗氧化能力。

 

组织细胞总抗氧化能力检测试剂盒(ABTS法)

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