服务热线
13764793648
Related articles
所有产品仅供科研使用,不能用于食用和医疗等
RNATrip(总RNA提取试剂)
RNA Trip成功避开各种商业RNA提取试剂盒的种种弊端,采用新的技术和工艺,在提取过程中既能有效裂解组织细胞,强烈抑制RNA酶活性,保护RNA免受降解,同时也能极为有效地分离去除DNA和蛋白质。RNAtrip使RNA分离如同提取质粒DNA一样简单可靠,可在30-60分钟内完成,获得*纯度的总RNA沉淀,可用于RT-PCR、Northern Blot、RNA酶保护、Poly(A) mRNA纯化、体外翻译等实验。
操作步骤:
1. 组织细胞破碎与裂解(请在冰上操作)
(1) 固体组织。按比例每50-100 mg组织加1 mL RNAtrip试剂进行组织匀浆裂解。
(2) 培养细胞。每5-10´106个细胞加1 mL RNAtrip试剂裂解。
(3) 液体标本:如体液、尿液、全血。每100ml液体样品加1 mL RNAtrip裂解。
2. 将组织细胞裂解物转移到1.5 mL离心管,置冰上10分钟。
3. 加入0.2体积的氯反(0.2mL),充分颠倒混匀,冰浴5 分钟,溶液分相。有时分相不明显,不影响提取。
4. 12,000 ´ g 4 oC离心10分钟,溶液分为两相。RNA在上层水相,下层为有机相,两相界面是一层薄膜其厚度与组织细胞类型和多少有关。小心吸出0.5mL上层水相转移到新离心管。
5. 加入等体积异丙醇(0.5mL)于上清液充分混匀。冰上孵育10 分钟沉淀RNA。
6. 12,000 ´ g,4 oC 离心10分钟。管底可见少许RNA沉淀。
7. 弃上清。立即加入1 mL 用DEPC水配制的75%乙醇,颠倒混匀数次洗涤沉淀。12,000 ´ g离心5分钟。弃上清,尽量*吸去管壁上的液体。
8. 敞开管口空气干燥5-10分钟使残留液体挥发,略微干燥RNA沉淀即可。用50-100 ml自备的DEPC处理的高压消毒纯水或TE溶解沉淀。RNA溶液可保存于-70 oC或液氮中。
RNATrip(总RNA提取试剂)