内毒素清除剂(EndotoxinRemovalReagent)
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内毒素清除剂(EndotoxinRemovalReagent)内毒素(endotoxin)的化学本质为脂多糖(lipopolysaccharides),是革兰氏阴性菌细胞壁的主要组成成分。脂多糖共价连接到非极性的疏水性类脂A(lipid A)形成带负电荷的大分子,同时还具有一个亲水性的寡糖核,因而具有疏水和亲水双重性质。
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内毒素清除剂(EndotoxinRemovalReagent)
内毒素(endotoxin)的化学本质为脂多糖(lipopolysaccharides),是革兰氏阴性菌细胞壁的主要组成成分。脂多糖共价连接到非极性的疏水性类脂A(lipid A)形成带负电荷的大分子,同时还具有一个亲水性的寡糖核,因而具有疏水和亲水双重性质。制备质粒DNA和重组蛋白时,细菌破壁之后将释放大量脂多糖。无论是普通制备纯化程序,还是离子交换、凝胶排阻过滤、甚至是氯化铯超速离心等高级制备程序,脂多糖将不可避免地与DNA或蛋白质牢固结合而被共同纯化。脂多糖具有强烈的免疫活性和细胞毒性,并能产生多种复杂的细胞生物学效应,大多数情况下会明显干扰并产生不可预测的实验结果。例如在DNA转染实验中,内毒素竞争性干扰转染试剂与DNA的结合,显著降低转染效率,并产生明显细胞毒性, 降低外源基因表达水平。在体转染时, 与DNA结合的内毒素无疑是主要的致热原。DNA、蛋白质或其它样品中内毒素污染,无论是对原代和传代细胞还是整体动物均具有显著的毒性作用。
内毒素清除剂能与DNA、重组蛋白以及液体样品中的内毒素特异结合。在特定pH、盐浓度、温度条件下,经过室温12000 rpm离心,DNA或蛋白质等保留在水相,内毒素被浓缩到极小体积的下层相而被清除,从而达到清除内毒素效果。经过3次重复抽提可将活性为5,000~50,000 EU/ml的内毒素水平降低到5~0.5 EU/ml以下,即降低1,000~10,000倍。
内毒素清除剂(EndotoxinRemovalReagent)