甘油含量检测试剂盒(专用于检测液体样本)
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甘油含量检测试剂盒(专用于检测液体样本),甘油是甘油三酯的水解产物。与游离脂肪酸一样,甘油含量是甘油三酯水解反应的可靠检测指标,但检测更加方便。本试剂盒采用优化步骤,能够检测实体组织、细胞中的甘油含量,线性范围为10-1200µmol/L
所有产品仅供科研使用,不能用于食用和医疗等
甘油含量检测试剂盒(专用于检测液体样本)
上海信帆生物供应甘油检测试剂盒,可以检测的样本包括血液、细胞培养基、体液、酒类饮料中的甘油浓度。
原理:在 ATP 存在下甘油被甘油激酶磷酸化为 3-磷酸甘油,再被甘油磷酸氧化酶氧化产生过氧 化氢;在过氧化物酶作用下生色底物转化为苯醌亚胺,其光密度值与甘油浓度成正比。
适用范围:测定血液、细胞培养基、体液、酒类饮料中的甘油浓度。
组成 :
R1 试剂 40 ml R2 试剂 10 ml
4 mmol/L 甘油标准品 1 ml
4 ºC,储存 6个月。
所需设备:酶标仪、生化分析仪或 721、722 型可见光分光光度计。最佳工作波长 550nm,如 无此波长建议优先选用 570nm、次选 530、490nm。
操作步骤:
一. 样本处理: 酒类、饮品、清澈液体样本:可直接进行测定,如超过线性范围可用蒸馏水或生理盐水稀释后 再测定。
培养液:取不含酚红、无颜色、无血清的细胞培养基,如有细胞碎片应 4ºC,,12,000g 离心 5min,
取上清进行测定。
血液:新鲜抗凝血,4ºC,2,000g 离心 5min 得到血浆;非抗凝血,先 4ºC 静置 2h 得到血清后, 2000g 离心 10min,除去血细胞。将得到的血浆/血清 70ºC 加热 10 分钟灭活內源脂肪酶,12,000g 离心 10min ,取上清测定或-20ºC 保存。
二 .工作溶液配制:按 4:1 比例,取 4 ml 试剂 R1 与 1 ml 试剂 R2 混合,立即使用或 4ºC 保存
<1 天,变色弃去。
三 .标准品稀释:用蒸馏水、生理盐水或与样品缓冲液一致的液体,将 4 mM 甘油标准品倍比稀 释为 1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125 µmol/L,通常取其中 4~6 管即可, 注意设置 0 浓度对照反应管。
四. 甘油浓度测定:
1.参见下表进行加样。为使反应时间尽量一致,减小实验误差,可先加入标准品、待测样品,然后再加入工作溶液。(注意:当甘油浓度较低时,可将待测样品与工作溶液按照 100µl:100µl体积混合,然后再进行测定,但是如果样品体积超过 100µl 时将会稀释工作液中酶的浓度,使 反应灵敏度下降。如果待测样品浓度超过线性范围,可进行适当稀释,然后根据稀释倍数来计算样品中甘油浓度。)
2.37ºC 或 25ºC 反应 15 分钟。反应平衡后颜色在 60 分钟内稳定。 3.先用蒸馏水+工作液的空白管调零,然后测定各管 OD 值。
4.绘制标准曲线并计算甘油浓度。
附 Excel 作图步骤:各标准管 OD 值为 y 轴,标准品浓度为 x 轴。(1)鼠标左键圈住数据,点击
做图向导,选择-散点图-,点击-完成-。(2)鼠标右键点图上的某一点,点击-添加趋势线-,点击
-选项-,点击-显示公式-和-R2 值
甘油含量检测试剂盒(专用于检测液体样本)