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NHS活化琼脂糖凝胶FF

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NHS活化琼脂糖凝胶FF
英文名称:NHS activated-Berpharose FF
货号:B2828
规格:10ml
本产品仅供科研实验用,不做其它用途!

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NHS活化琼脂糖凝胶FF


英文名称:NHS activated-Berpharose FF


货号:B2828


规格:10ml


1.      产品介绍


NHS-琼脂糖凝胶FF是一种将琼脂糖凝胶微球用NHS活化形成的生物亲和层析分离


介质。该产品保留了琼脂糖极-好的亲水性及大网架结构,同生物活性大分子有很好的相容性,具有载量高、非特异性吸附少和流速快等特点。本活化的琼脂糖凝胶能温和地同氨基基团反应,特别适合偶联抗体、链霉亲和素、酶和核酸等功能性生物大分子。


2.规格


1ml、10ml、100ml、500ml 使用方法


应用举例:


NHS-琼脂糖凝胶FF偶联抗体


①配制抗体:取100 mg IgG用10 ml偶联缓冲液(0.2 M NaHCO3,0.5 M NaCl,pH8.3)溶解。


②偶联反应:取10 ml NHS-琼脂糖凝胶FF,用50 ml的1 mM HCl分三次清洗去除保存液,之后立即加入到抗体偶联溶液中,4℃振荡偶联6 h或者偶联过夜。


③封闭:上述溶液过滤,用50 ml偶联缓冲液清洗偶联后的凝胶,用10 ml封闭缓冲液(0.2 M NaHCO3,0.5 M NaCl,0.5 M乙醇胺,pH8.3)于室温振荡4 h(或者过夜)以封闭未偶联的基团,之后用20 ml蒸馏水清洗干净即可。


④检测:用SDS-PAGE检测偶联前后的反应液并计算偶联效率,偶联好的填料根基特性测定功能和载量。


 

5.注意事项:


1)偶联缓冲液可以是碳酸盐、硼酸盐和磷酸盐缓冲液,但绝对不能使用氨基缓冲体系(如Tris-HCl缓冲液)。


2)稳定的配基可以直接溶于0.2 M NaHCO3,可适当提高偶联温度(如室温)将偶联时间缩短至1~2 h。


3)如对配基的稳定性不够了解,可以选择不同pH值缓冲液和不同温度,用0.5~1 ml配基相应浓度的溶液,在无填料的条件下模拟偶联反应,观察溶液是否会产生沉淀。有沉淀产生说明偶联效果不佳,可适当降低缓冲液pH值或温度。同时可以添加约5%的甘油或PEG保护蛋白,避免产生沉淀。


4)根据偶联蛋白的稳定性选择合适的偶联pH值和温度。偶联较适pH值为pH7.5~9.0,室温或4℃均可。提高偶联温度能够提高配基的偶联效率。


5)偶联蛋白溶液的浓度以5~15 mg/ml为佳。偶联凝胶体积和配基溶液的体积比以1:0.5~1:2.0为佳。


6)如果偶联的配基不稳定,可于4℃振荡偶联1~12 h以维持配基的活性。偶联配基后应尽快清洗填料,避免配基在高pH条件下失活。


7)封闭缓冲液一般使用带氨基的小分子试剂,如乙醇胺、Tris等。于pH8~9、室温条件下封闭数小时可完-全封闭。推荐封闭缓冲液:0.5 M乙醇胺,0.5 M NaCl,pH8.3或0.1 M Tris-HCl,pH8.5。


8)偶联中尽量使用温和的混匀方式,如振荡、翻转和旋转等,如使用磁力搅拌器或者机械搅拌,需要降低搅拌速度,使填料能够混匀完-全悬浮即可,避免剧烈搅拌导致凝胶微球破碎。


9)NHS-琼脂糖凝胶FF需现取现用,避免取出后放置时间过长导致活性降低。


10)仅供科研实验使用


NHS活化琼脂糖凝胶FF

 


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