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2018-08-31H+K+ -ATP 酶活力测试盒
二、样本前处理
准确称取胃粘膜组织重量,按重量(g):体积(mL)=1:9
的比例,加入 9 倍体积的生理盐水,冰水浴条件下制备成 10%
的组织匀浆液,2500 转/分,离心 10 分钟,取上清液,再用生
理盐水 5 倍稀释成 2%的浓度待测。
六、测试原理:
ATP 酶可分解 ATP 生成 ADP 及无机磷,测定无机磷
的量可判断 ATP 酶活力的高低。H +K + -ATP 酶是一种能被
钾专一激活而不被乌本苷抑制的 ATP 酶。
七、注意事项:
1、具有微量、灵敏、快速的特点。所以对测定所用试管要
求严格,要没有一点磷,若试管放过磷酸或磷酸缓冲液,
一定要洗得非常干净,即先用洗洁精加水煮,再用自来
水冲,最后用双蒸水冲干净。用一次性塑料管或新
玻璃管,避免磷污染是检测成败的关键。
2、定磷剂配好后,不可放置太久,一般保存 1~5 天,
现用现配。随时放冰箱。
3、采用先配 A、B 两种混合液,然后按简化操作步骤
检测。这样快捷、准确。
4、所有配试剂的器皿均要专用,包括吸硫酸的吸管及盛水
的器皿。
八、测定意义:
H +K + -ATPase 对胃酸的分泌及胃的消化功能具有重要
的生理意义,70 年代 Forte 等人首先在牛蛙的胃粘膜上分
离出一类能被 K +专一激活而不被乌本苷抑制的 ATPase 即
H +K + -ATPase,随后 Lee·j 等人又证明了含有该酶的膜囊泡
运动跨膜运输质子的作用,从而为胃酸分泌的机理奠定了
分子学基础,H +K + -ATPase 定位于胃粘膜壁细胞(Parietal
lell)上,属于第二类质子泵,它通过自身的磷酸化(E1→E2)
与去磷酸化(E2→E1)完成的 H + /K +电中性(electroneutral)
跨膜离子转运,不断将壁细胞内的质子运输到膜外行使泌
酸的功能。
H+K+ -ATP 酶活力测试盒