肌酸激酶（CK）测定试剂盒 生化试剂

肌酸激酶（CK）测定试剂盒

（比色法）

一、测定原理：

肌酸激酶(Creatine Kinase，CK)催化三磷酸腺苷和肌酸，

生成磷酸肌酸，后者很快全部水解为磷酸，此时三磷酸腺苷

和二磷酸腺苷仍稳定，加入钼酸铵可生成磷钼酸，可进一步

还原成钼蓝，根据生成无机磷的量可算出酶的活力。

二、试剂组成与配制：（50 管/24 样）

试剂一：液体 6mL×1 瓶，冷冻或者 4℃保存 3 个月。

试剂二：液体 1.5mL×1 瓶，冷冻或者 4℃保存 3 个月。

试剂三：粉剂 2 支，临用时每支加双蒸水 2 mL，4℃保存 6 个

月。(注:粉剂量较少,可能附着于管壁或盖子上,并非

空管,如使用时肉眼不可见,可将其 4000 转/分钟离心

2 分钟后使用)

试剂四：粉剂 1 支，临用前每支加双蒸水 6mL, 4℃保存 6 个月。

试剂五：粉剂 2 支，冷冻保存 6 个月，临用时每支加双蒸水

2mL。配好后-20℃以下保存 5 天。

试剂六：液体 6mL×1 瓶，室温或 4℃保存 6 个月。

试剂七：粉剂×1 瓶，4℃保存 6 个月，加双蒸水 60mL，可适

当加热溶解，溶解后即为试剂七应用液，4℃保存。

试剂八：粉剂×2 瓶，

4℃保存 6 个月，临用时每支加双蒸水 20mL，

溶解后即为试剂八应用液 4℃保存，颜色变深后弃用。

2.5mol/L 硫酸：50mL×1 瓶,室温保存 6 个月。

附带双蒸水 200mL，供配制试剂时用。

定磷剂的配制：试剂七应用液︰试剂八应用液︰双蒸水︰

2.5mol/L 硫酸= 1︰1︰2︰1。配好的定磷剂应为浅黄色，

若无色则失效，若呈蓝色则为磷污染，定磷剂需现用

现配。配好后 4℃可保存 48 小时。

四、注意事项：

1、所有样品均要检测测定管及对照管。

2、组织匀浆 4℃存放不可超过 10 小时，组织块冷冻可延长存

放时间。

3、血清 4℃存放不可超过 10 小时，冷冻可延长存放时间。

4、此法为微量，灵敏，快速法。所以对测定管子要求严格，要

没有一点磷的管子，若放过 H3PO4或其缓冲盐的管子，一

定要洗得非常干净，用洗涤剂加水煮，再用自来水冲，最

后用双蒸水冲。最．好．用．一．次．性．塑．料．管．或．者．用．新．的．玻．璃．管．。

这样可以避免磷污染。这一点很重要，常常是实验成败的

关键因素。

5、定磷剂配好后，不可放置太久，一般 4℃可保存 48 小时，

最好现用现配。随时放冰箱。

6、大批量样本操作时，最好采用简化操作法，这样快捷、准确。

7、所有配试剂的器皿要专用，或者用新的（包括吸硫酸的吸管，

及盛双蒸水的器皿以及吸各种试剂的吸嘴）。

五﹑最佳取样浓度的摸索：

类不同，其最佳取样浓度不同。根据

CK 标准曲线(见附录)，在每测定一种新的样品前，最

好摸索一个最佳取样浓度，一般把绝对 OD 值控制在

0.05～0.5 之间。

1、血清（浆）最佳取样浓度的摸索：

由于正常情况下血清（浆）中的 CK 活力比较低。

但是如果用户的模型组的 CK 活力会明显增高，那最好

在批量实验前取模型组做个预试，一旦 CK 活力＞

3.5U/mL，就需要用生理盐水将该模型组血清稀释后检

测。若含量太高（曲线的平坦部分）,则看不出组与组

之间的显著性差异。

2、组织匀浆最佳取样浓度的摸索：

如果您使用本试剂盒测试某一种新的样品时，最好

先做三支不同浓度的测试管。例如测肌肉组织匀浆，取

样浓度分别为 1%、2%、5%，然后计算酶的浓度，选

取酶的浓度在 0.01～0.1mg/mL（即：酶活力在 0.35～

3.5U/mL，此段曲线基本呈直线关系）的样本浓度为最

佳取样浓度,进行批量实验。

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