羧酸酯酶活性测定试剂盒 生化试剂

羧酸酯酶活性测定试剂盒

（ Carboxylesterase，分光光度法 50T/48样）

一、测定意义

哺乳动物羧酸酯酶（CarE）广泛分布于组织和器官中，

大部分的羧酸酯酶属于丝-氨酸水解酶家族。CarE催化含酯

键、酰胺键和硫酯键的内源性和外源性物质的水解，但不

能催化水解乙酰胆-碱及其类似物。CarE参与脂质运输和代

谢，并且与多种药物、环境毒物以及致癌物的解毒和代谢

有关，有机磷农药可结合并且抑制CarE活性。

二、测定原理

CarE能催化乙酸-1-萘酯生成萘酯，固蓝显色,在450nm检

测光吸收速率来监测萘酯生成速率，从而计算CarE活性。

三、自备仪器用品

可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液

器枪、1mL玻璃比色皿、无水乙醇和蒸馏水。

四、试剂组成和配制 （未开封产品3个月内有效）

试剂一：液体50mL×1 瓶，4℃保存

试剂二：液体30mL×2 瓶，4℃保存

试剂三：粉剂×2支，4℃保存，临用前取1支试剂三加1.2mL

无水乙醇充分溶解

试剂四：粉剂×2支，-20℃保存

工作液配制：临用前取试剂二1瓶，取少量试剂二加入到1

支试剂四中溶解，然后把溶解的1支试剂四和1支试

剂三加入到该瓶试剂二中，混匀充分，过滤，4℃避

光保存，可用1周。

五、样本前处理

1、细菌、细胞样品制备：收集细菌或细胞到离心管内，离

心后弃上清；按照每200万细菌或细胞加入400μL试剂

一，超声波破碎细菌或细胞（功率20%，超声3s，间隔

10s，重复30次）；12000g在4℃离心30分钟，取上清液

待测。

2、按照组织质量（g）：提取液体积(mL)1：5~10 的比例

（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一进行冰浴匀浆。

12000g，4℃离心30分钟，取上清液待测。

3、液体样本：直接取样。

六、测定步骤

1. 分光光度计预热30min 以上，调节波长到450nm，用蒸馏

水调零。

2. 工作液在37℃中预热30min 以上。

3. 空白管：依次在1mL 玻璃比色皿中依次加入5μL蒸馏水，

1000μL预热的工作液，迅速混匀后在450nm测定10s和

190s光吸收A1 和A2，△A空白管=A2-A1。注意：空白管只需

做1-2次。

4. 测定管：：依次在1mL 玻璃比色皿中依次加入5μL上清

液，1000μL预热的工作液，迅速混匀后在450nm测定10s

和190s光吸收A3 和A4，△A测定管=A4-A3。

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