ATP 酶测定试剂盒 生化试剂

ATP 酶测定试剂盒

（货号：A016-1比色法）

（可测 Na +k +、Ca 2+Mg 2+、Ca 2+、Mg 2+-ATPase 样本需高速离心 ）

此试剂盒可测试高速冷冻离心后的红细胞膜、组织细胞膜、线粒体、微粒体的 ATP 酶。

一、试剂组成与配制（50 管/48 样 A016-1-1）：

试剂一：液体 10mL×2 瓶，4℃保存。

试剂二：液体 10mL×1 瓶，4℃保存。

试剂三：液体 10mL×1 瓶，4℃保存。

试剂四：粉剂×3 支，-20℃以下保存。用时每支加双蒸水

5mL，现用现配。余下的-20℃以下可保存一周。

试剂五：粉剂×1 支。用时加双蒸水 5mL，适当加热溶解，

4℃保存。

试剂六：粉剂×1 支。用时加双蒸水 10mL，室温保存。

[注 1]

试剂七：液体 10mL×1 瓶。用时加双蒸水至 25mL，4℃保

存。

试剂八：粉剂×3 瓶。用时一支加双蒸水 40mL 溶解（溶解

后 4℃可避光保存一周）。

试剂九：粉剂×1 瓶。用时每瓶加双蒸水 100mL 溶解。室

温保存。

试剂十：2.5mol/L 硫酸 100mL×1 瓶，4℃保存。

试剂十一：10mmol/L 标准磷贮备液 10mL×1 瓶，4℃保存。

双蒸水: 1 瓶。

1μmol/mL 标准磷应用液配制：用时将贮备液 10 倍稀释，

即取 1mL 加双蒸水至 10mL。

定磷剂的配制：按双蒸水∶试剂十∶试剂八∶试剂九

=2∶1∶1∶1 的比例配制，配好的定磷剂应

为浅黄色，若无色则试剂失效，若是蓝色

则为磷污染，定磷剂需现用现配。

二、试剂组成与配制（100 管/96 样 A016-1-2）：

试剂一： 液体 10mL×3 瓶，4℃保存。

试剂二： 液体 10mL×1 瓶，4℃保存。

试剂三： 液体 10mL×1 瓶，4℃保存。

试剂四： 粉剂×5 支，

-20℃以下保存。用时每支加水 5mL，

现用现配。余下的-20℃以下可保存一周。

试剂五： 粉剂×2 支。用时每支加双蒸水 5mL，适当加热

溶解，4℃保存。

试剂六： 粉剂×1 支。用时加双蒸水 10mL，室温保存。

[注 1]

试剂七： 液体 10mL×1 瓶。用时加双蒸水至 25mL，4℃

保存。

试剂八： 粉剂×5 瓶。用时一支加双蒸水 40mL 溶解（溶

解后 4℃可避光保存一周）。

试剂九： 粉剂×2 瓶。用时每瓶加双蒸水 100mL 溶解。室

温保存。

试剂十：2.5mol/L 硫酸 100mL×2 瓶，4℃保存。

试剂十一：10mmol/L 标准磷贮备液 10mL×1 瓶，4℃保存。

双蒸水: 2 瓶。

1μmol/mL 标准磷应用液配制：用时将贮备液 10 倍稀释，

即取 1mL 加双蒸水至 10mL。

定磷剂的配制：按双蒸水∶试剂十∶试剂八∶试剂九

=2∶1∶1∶1 的比例配制，配好的定磷剂

应为浅黄色，若无色则试剂失效，若是蓝

色则为磷污染，定磷剂需现用现配。

[注 1]：试剂六为过饱和溶液，所以在配制时最好用 90℃～

100℃的热双蒸水 10.3mL（热胀冷缩）边隔水加热

边用玻璃棒搅拌，以使其充分溶解。一次实验用不

完再用时可能有结晶，用之前可以再次边隔水加热

边玻璃棒搅拌使其溶解。

[注 2]：配试剂最好用新的烧杯、玻棒和玻璃移液器，也可

以用一次性塑料器皿，避免磷污染。

四、参考取样量:

红细胞膜取 100μL，2%组织细胞膜取 100μL，2%线粒

体取 100μL，2%微线粒体取 100-200μL。

五、如果您的样本很多可以采用简便操作法：

测试前将 A、B、C、D、E 五种混合试剂配制好：

根据规范操作表中各管的试剂量乘以您所需要测试的

样本数（n）再放 1～2 只管的量（避免吸到最后试剂量不

够），然后纵向混合。

七、测定意义：

ATP 酶存在于组织细胞膜及细胞器膜上，是生物膜上的一

种蛋白酶，它在物质运送、能量转换以及信息传递方面具有重要

的作用。

八、测定原理：

ATP 酶可分解 ATP 生成 ADP 及无机磷，测定无机磷的

量可判断 ATP 酶活力的高低。

九、注意点：

1、 此法具有微量、灵敏、快速的特点。所以对测定所用

试管要求严格，要没有一点磷，若试管放过磷酸或磷

酸盐缓冲液，一定要洗得非常干净，要先用洗洁精加

水煮，再用自来水冲，最后用双蒸水冲干净。最好用

一次性塑料管或新玻璃管，避免磷污染是检测成败的

关键。

2、 定磷剂配好后，不可放置太久，一般保存一天，最好

现用现配。随时放冰箱。

3、 最好采用先配 A、B、C、D、E 五种混合液中的几种，

然后按简化操作步骤进行检测。这样快捷、准确。

4、 所有配试剂的器皿均要专用，包括吸硫酸的吸管及盛

水的器皿，最好用新的。

5、本研究所有加厚的一次性塑料试管供应，请在订购试剂

的同时订购一次性塑料试管。

ATP 酶测定试剂盒