碱性磷酸酶染液(钙钴法)，CAKP 在 pH值 9.4 的环境下，以镁离子作为激活剂，能够把B-甘-油磷酸钠水解出磷酸，磷酸与高浓度的钙盐结合形成无色的磷酸钙，再与硝酸钻作用形成磷酸钻，经硫化胺处理形成黑色的硫化钻沉淀在酶活性处。

碱性磷酸酶染液(钙钴法)

( Cell alkaline phosphatase staincAkP)

检验原理

CAKP 在 pH值 9.4 的环境下，以镁离子作为激活剂，能够把B-甘-油磷酸钠水解出磷酸，磷酸与高浓度的钙盐结合形成无色的磷酸钙，再与硝酸钻作用形成磷酸钻，经硫化胺处理形成黑色的硫化钻沉淀在酶活性处。

基质液的配制:试剂二基质液 A: 试剂三基质液 B=20:1，混匀后待用，用多少配多少，滴染法每片只需基质液 A200，基质液 B10l，配好的基质液应为无色透明液体，尽快使用。试剂五的保存:试剂五需-20℃保存，必须在收到试剂后立即根据实验需要分装冻存，以避免反复冻融而导致试剂失效。

储存条件及有效期

本试剂盒中试剂五需置-20℃保存，其余试剂应置 2℃~8℃密封保存，有效期 6个月。

样本前处理

石蜡切片脱蜡及再水合:

1. 脱蜡:将石蜡切片放入 37℃~60℃的保温箱中 10 分钟左右，再放入二甲苯或无毒环保脱蜡剂 10 分钟，再放入二甲苯或无毒环保脱蜡剂 5 分钟。(本所有无毒环保脱蜡剂供应，可代替二甲苯，若使用本所无毒环保脱蜡剂，脱蜡时间调整为15 分钟X2 次)；

2. 水合:将已脱蜡的切片放入 95%乙醇2分钟-75%乙醇 2分钟-30%乙醇 2分钟一蒸馏水洗 2 分钟X3 次:

染色步骤

可用滴染法也可选用染缸法，样本量少可用滴染法，样本多可用染缸法

一、固定及水润

1.新鲜血涂片、骨髓涂片、细胞涂片或爬片、用试剂一进行固定约 2~5 分钟，自然晾干。待染(冰冻切片及石蜡切片按常规处理，不需要固定)；

2.水润: 固定后的样本及已脱蜡并水合的组织切片，请在染色前将样本切片用蒸馏水润洗30 秒，以保持湿润；

二、滴染法

1.滴加基质液数滴，覆盖已处理好的样本上， 37℃避光孵育 15 分钟左右，甩掉多余的染液，不要水洗；

2.立即滴加试剂四染液染色 5 分钟，水洗 30 秒，甩去多余的水，但要保持样本湿润；

3.再滴加试剂五染色 30 秒左右，水洗 30 秒，甩去多余的水，但要保持样本湿润；

4.滴加试剂六复染 30 秒，水洗 30 秒，甩干，镜检；

三、染缸法

1.将将玻片放入基质液染缸中，37℃避光孵育 15 分钟，不要水洗

2.将玻片转移至试剂四染液染缸中染色 5 分钟，水洗 30 秒，甩去多余的水，但要保持样本湿润；

3.再放入试剂五染液染缸中染色 30~60 秒左右，水洗 30 秒，甩去多余的水，但要保持样本湿润；

4.再放入试剂六染缸中染色 30 秒，水洗 30 秒，甩干，镜检；

染色结果

胞质中阳性反应呈现灰黑色颗粒或块状、条状沉淀。

碱性磷酸酶染液(钙钴法)