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2018-04-10TTC 染液
(货号:D025-1 TTC Stain)
试剂组成
试剂配制
TTC 染色1 号染色液配制:临用前将 1支 TTC 粉剂倒入1 瓶溶剂中,充分溶解混匀。
组织冲洗应用液的配制。临用前取组织冲洗浓缩液 1瓶,用蒸溜水 1:9 稀释(即 10 倍稀释)配成组织冲洗应用液 100ml。(可一次性稀释,也可按 1: 9 比例需多少稀释多少)。
4%多聚甲醛固定应用液的配制:
1. 临用前将多聚甲醛溶剂贮备液5ml 用蒸溜水 1:19 稀释(即 20 倍稀释配成应用液 100ml。2.将多聚甲醛粉剂1 瓶倒入已配好的应用液 100m 中,100摄氏度左右水浴,用玻璃棒边加热边搅动直至溶解。因多聚甲醛有刺激性,请在通风橱内 配制。
储存条件及有效期
本试剂盒应置室温避光密封保存,有效期一年。
样本前处理
动物样本前处理:
1小动物用 0.4%戊-巴-比-妥-钠 (50mg/kg) 麻醉后,用组织冲洗应用液经腹主动脉灌注将组织中的血液冲洗干净。(脑组织不需要冲洗,若心脏等梗塞需将血液冲洗干净)
2、然后快速取脑组织或其它组织,将取下的组织在冷生理盐水中漂洗后,放-20°C冰箱中速冻20 分钟左右。注:(有时脑组织放-20C冰箱中冻二周后染色仍然很好)
3、染色前可从冰箱中取出组织,迅速用快刀每隔 2mm 切片备用。若组织变软,还可放入-20C冰箱继续冰冻,变硬后再切。切片时放在冰块上。操作时在冰块上放上锡箔纸,垫在组织与冰块之间,这样组织不会粘在冰块上。
植物样本前处理:
若植物造模,可将所需染色植物用开水烫死,此组织不着色。而未用开水烫的活组织(有生命力的组织)应呈玫瑰红色。
染色步骤
1.将新鲜组织切片置装有 TTC 染色液的最小器皿中(如小培养皿或 6孔板、12 孔板、24 孔板中), 37摄氏度避光孵育 15~30min (孵育箱可以是气浴箱或水浴箱。)边孵育边观察样本颜色变化。
注:动物组织切片非梗死区 呈玫瑰红色,梗死区组织发白。
植物样本活组织呈玫瑰红色,死组织及无生命力的组织不着色。
2.将已染过的 TTC 染色液用移液器取出放到另一个器皿中,4~8摄氏度保存(TTC 染液可反复染色 2~3 次).
3.然后吸取已配好的组织冲洗应用液将组织表面多余的染色液冲洗掉,此时可肉眼观察
并立即照相。
4.若需长久保存,可用 4%多聚甲醛固定应用液固定。
染色结果
镜检结果:
动物组织:非梗死区染为红色,梗死区呈灰白色,红色区与灰色区之间为缺血区
植物样本:活组织呈玫瑰红色,死组织及无生命力的组织不着色。
TTC 染液