全血乳酸(Lactic Acid LD)测定试剂盒 生化试剂
- 型 号:
- 参考价:0~0
全血乳酸(Lactic Acid LD)测定试剂盒,以 NAD+为氢受体,LDH 催化乳酸脱氢产生丙酮酸,使NAD+转化成 NADH。其中 PMS 递氢使 NBT 还原为紫色呈色物,呈色物的吸光度在 530nm 时与乳酸含量成线性关系。
全血乳酸(Lactic Acid LD)测定试剂盒
(测全血)
一、测定原理:
以 NAD+为氢受体,LDH 催化乳酸脱氢产生丙酮酸,使
NAD+转化成 NADH。其中 PMS 递氢使 NBT 还原为紫色呈
色物,呈色物的吸光度在 530nm 时与乳酸含量成线性关系。
二、试剂组成及配制(50 管/48 样):
蛋白沉淀剂:溶液 50mL×1 瓶,室温保存 6 个月,如有结晶,
则取上清进行实验。
试剂一:酶稀释液 60mL×1 瓶,4℃~8℃冰箱保存 6 个月。
试剂二:酶贮备液 0.6 mL×1 支, 4℃~8℃冰箱保存 6 个月;
用时用一次性吸头进行取样。
酶工作液的配制:临用前将试剂二(酶贮备液)和试剂一
(酶稀释液)按照 1︰100 的体积比进行混合,现 用
现配,4℃保存 24 小时内有效;
试剂三:显色溶液 6 mL×2 瓶, 4℃~8℃避光冰箱保存 6
个月。
试剂四:粉剂×2 支,短期内使用可放 4℃~8℃冰箱,长
期(6 个月)存放请置-20℃以下。(注:粉剂量较少,
可能附着于管壁或盖子上,并非空管,如使用时肉眼
不可见,可将其 4000 转/分钟离心 2 分钟后使用)
显色剂的配制:取 1 瓶试剂三,转移 1mL 进入一支试剂四
粉剂中, 反复颠倒离心管混匀,待粉剂溶解后,再用
微量移液器将离心管中的液体转移到瓶中,再从这
瓶试剂三中移出 1mL 到原试剂四离心管中,如此反
复 2~3 次,使二者充分混合溶解,配成显色剂,
2℃~8℃避光保存 2 周内有效。
试剂五:终止液,60 mL×2 瓶, 4℃~8℃冰箱保存 6 个月。
试剂六:3mmol/L 标准液,2 mL×1 支, 4℃~8℃冰箱保
存 6 个月。
三、操作步骤:
1、前处理:
上清液制备:取待测样本 0.1mL,加入蛋白沉淀剂 0.6mL 混
匀,3500~4000 转/分,离心 10 分钟,取上
清液进行测定。
[注]: 1、全血及时用蛋白沉淀剂制备成乳酸上清液。
2、制成的乳酸上清冰箱 4℃或者 0℃以下保存,
15~30 天稳定不变。
3、如果您的血样很少,您可以取 0.05mL 全血加
0.3mL 蛋白沉淀剂。
五、注意点:
1、应取空腹或静止状态下的静脉血,并避免血液淤滞,如
用止血带,应在针头刺入静脉后马上放开,然后等 2 分
钟后再抽血。
2、血液要新鲜,是当天完成,如果当天完不成,可将
样本进行样本前处理后,将上清液 4℃或-20℃保存可稳
定 15~30 天。
3、蛋白沉淀剂如有结晶, 则取上清进行实验。
4、在批量实验前需要进行预实验,以确定测定 OD(测
定 OD 值-空白 OD 值)在 0.05~0.35 之间。如果测定绝
对 OD 小于 0.05,则需要加大样本浓度重新测定;如果
测定 OD 大于 0.35,则需要将样本稀释后重新测定。
附录Ⅰ:乳酸标准曲线的制备
1、前处理:
将 6mmol/L 的乳酸标准用双蒸水稀释成不同浓度:
1mmol/L、2mmol/L、3mmol/L、4mmol/L、5mmol/L、6mmol/L,
进行标准曲线的制备。(标准曲线仅供参考,用户可以不做,
而且 6mmol/L 标准液本试剂盒不提供,如有需要请咨询本公
司)
全血乳酸(Lactic Acid LD)测定试剂盒