谷-胱甘肽还原酶活性系数测试盒 生化试剂
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谷-胱甘肽还原酶活性系数测试盒,取新鲜全血样本 10μL 加入双蒸水 990μL,漩涡混匀 1分钟使溶血,制备成 100 倍稀释的溶血液按前 Ian 的操作表加样。
谷-胱甘肽还原酶活性系数测试盒
(GRAC 100T/48 样)
一、试剂组成及配制:
试剂一:缓冲液,32mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:底物贮备液,0.22mL×1 瓶,-20℃避光保存。
底物稀释液,2.2 mL×1 瓶,-20℃保存。
底物应用液的配制:临用前按底物贮备液:底物稀释液=1:9
的比例 10 倍稀释,制备成底物应用液,用不完的
应用液三天内 4℃保存,三天以上-20℃保存。
试剂三:基质粉剂×2 支,-20℃避光保存。
基质稀释液,2.5mL×2 瓶,-20℃保存。
基质应用液的配制:临用前将 1 支基质粉剂加入到 1 瓶基质
稀释液中充分溶解,制备成基质应用液,用不完
的应用液三天内 4℃保存,三天以上-20℃保存。
试剂四:促进剂粉剂×2 支,-20℃避光保存。
促进剂稀释液,1.3mL×2 瓶,-20℃保存。
促进剂应用液配制:临用前将 1 支促进剂粉剂加入到 1 瓶促
进剂稀释液中充分溶解,制备成促进剂应用液,用
不完的应用液三天内 4℃保存,三天以上-20℃保
存。
试剂五:沉淀剂,40mL×2 瓶,4℃保存。
试剂六:显色剂粉剂×2 支,4℃避光保存。
显色剂稀释液,50mL×2 瓶, 4℃避光保存。
显色剂应用液的配制:临用前将 1 支显色剂粉剂加入到 1
瓶显色剂稀释液中充分溶解,制备成显色剂应用
液,4℃避光保存。
四、测定原理:
谷-胱甘肽还原酶(GR)在有还原型辅酶Ⅱ存在的条件
下,可催化氧化型谷-胱甘肽(GSSG)还原为还原型谷胱甘
肽(GSH),该酶的辅基为黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)。因
此, 当核黄素缺乏而导致FAD不足时, 则可使此酶的活性下
降。通过测定谷-胱甘肽还原酶活性系数来评价机体核黄素的
营养状况。
五、检测意义:
核黄素在体内以FAD的形式与酶蛋白结合成各种黄素
蛋白, 作为电子转移系统参与氧化还原过程。核黄素缺乏时,
产生皮肤、粘膜和眼部等一系列的症状。为了早期发现核黄
素缺乏, 及时采取防治措施, 有必要进行核黄素营养状况的
评定。
核黄素缺乏时, 谷-胱甘肽活性系数迅速增高, 而补充核
黄素后就降为正常。故谷-胱甘肽还原酶活性系数
(Glutathione Reductase Activation Coefficient, GRAC)是评
定核黄素慢性缺乏时体内核黄素总水平的准确指标。应用谷
胱甘肽还原酶活性系数(GRAC)的值评价核黄素营养状况
具有灵敏、稳定、准确、微量、能反映体内代谢利用情况等
优点。
附录 I:全血中谷-胱甘肽还原酶活性系数的测定
一、样本前处理:
取新鲜全血样本 10μL 加入双蒸水 990μL,漩涡混匀 1
分钟使溶血,制备成 100 倍稀释的溶血液按前 Ian 的操作表
加样。(对光看一下是否透亮,若不透亮,有浑浊,则 4000
转/分,离心 5 分钟,取上清液测定即可)
附录Ⅱ:血清中谷-胱甘肽还原酶活性系数的测定
一、样本前处理:
取血清样本 200μL 加入 600μl 生理盐水,即按 1:3 进行
稀释后按操作表加样。
附录Ⅲ:组织中谷-胱甘肽还原酶活性系数的测定
一、样本前处理:
准确称取组织重量,按重量(g):体积(mL)=1:9 的比
例,加入 9 倍体积的生理盐水,冰水条件下制备成 10%的组
织匀浆,3500 转/分,离心 10 分钟,取上清液,再用生理盐
水 5 倍稀释后制备成 2%组织上清液按操作表加样。
谷-胱甘肽还原酶活性系数测试盒