内源性一氧化碳（CO）-测试盒，根据碳氧血红蛋白（HbCO）和还原血红蛋白（Hb）吸收光谱的差异，选择 HbCO 吸光度之差而 Hb 吸光度之差为零的两个波长，应用双波长分光光度法测定样本在这两个波长下的吸光度差值（△OD），再通过标准曲线求出 HbCO 百分浓度，代入公式计算出内源性一氧化碳（CO）含量。

内源性一氧化碳（CO）-测试盒

（测血清、血浆）

一、测定原理：

根据碳氧血红蛋白（HbCO）和还原血红蛋白（Hb）吸收

光谱的差异，选择 HbCO 吸光度之差而 Hb 吸光度之差为

零的两个波长，应用双波长分光光度法测定样本在这两个波

长下的吸光度差值（△OD），再通过标准曲线求出 HbCO 百分

浓度，代入公式计算出内源性一氧化碳（CO）含量。

二、试剂组成及配制：（100T/50 样）

试剂一：溶血剂，100mL×1 瓶，4℃保存。

试剂二：缓冲液，100mL×3 瓶，4℃保存。

试剂三：碳氧血红蛋白测定粉剂×10 瓶，4℃避光密封保存。

碳氧血红蛋白测定工作液的配制：临用前，往每瓶测定粉剂

中加入 23mL 试剂二缓冲液，加盖颠倒混合，使

溶解，现用现配，用多少配多少，2 小时内用完，用

黑袋注意避光。

试剂四：制作 HbCO 百分曲线用的还原粉剂×6 支，4℃避光

密封保存。

试剂五：血红蛋白 Hb 测定浓缩液，1mL×2 支，4℃避光密封

保存。

血红蛋白 Hb 测定应用液的配制：临用前将浓缩液用蒸馏水 1∶

99 稀释，即 100 倍稀释，现用现配。配好的试剂 2～

8℃避光保存，可存放 1 个月以上。

三、操作步骤：

1、血清（浆）中血红蛋白 Hb 测定及计算：

取 0.05mL 样本（血清 、血浆）与 2.5mL 的血红蛋白测

定应用液（即将试剂五的浓缩液进行 100 倍稀释），混匀，

静置 5 分钟后，1cm 光径蒸馏水调零，540nm 测定各管吸光

度值。

血红蛋白含量的计算：

血红蛋白含量（g/L）= Α540 ×367.7

2、 样本前处理：

①、制备溶血液：取抗凝全血 0.01mL，加入试剂一溶血剂

1.2mL 混匀，静置 5 分钟，使溶血。

②、制备测定样本：取制备好的溶血液 0.1mL，加待测血浆

0.1mL，混合后制备成测定样本。

③、制备对照样本：取制备好的溶血液 0.1mL，加待测双蒸

水 0.1mL，混合后制备成对照样本。

四、碳氧血红蛋白（HbCO）百分浓度曲线：

【可自行制作 HbCO 百分浓度曲线，也可参照本所提供的 HbCO

百分浓度曲线】

〇 饱和碳氧血红蛋白与饱和还原血红蛋白的制备

1、取不吸烟健康人肝素抗凝全血 0.01mL，加入试剂一溶血液

1.2mL 混匀，静置 5 分钟使溶血。

2、从中取 2 份，每份 0.2mL，加入到两支具塞试管中，再分

别加入 2.3mL 试剂二缓冲液，混匀。

3、在通风橱内，向其中一支试管里通纯一氧化碳（CO），连

续通 15 分钟，再通入氮气 20 分钟，得到饱和 HbCO 溶液。

4、再向另一支试管通氧气（O2），连续通 20 分钟，得到饱和

HbO2溶液。

五、检测意义：

一氧化碳（carbon monoxide，CO）是与一氧化氮（NO）

极相似的小分子气态物质。90 年代以来的大量研究揭示，生

物体内源性CO不仅作为一种新型的神经递质参与中枢神经系

统的信息传递，还具有舒张血管、抑制血管平滑肌和血管内

膜增殖、抑制血小板聚集、调节体内激素分泌、抑制细胞凋

亡等多种生物学功能，在机体多种生理及病理状态中发挥重

要的作用。

六、计算公式：

〇 碳氧血红蛋白百分浓度（HbCO%）的计算：

通过分别测定 568nm 与 581nm 的吸光度，计算△OD

（A568-A581）的吸光度值差。再由标准曲线，通过回归

方程计算出碳氧血红蛋白百分比浓度，即 HbCO%。

【注 1】如不直接制作百分浓度曲线，也可参照本所提供

的百分浓度曲线，回归方程为：

y = 0.822x + 0.001

x 即为△OD（A568-A581）的吸光度值，y 即为碳氧血红蛋白

百分比浓度。

HbCO%=[ 0.822×△OD（A568-A581）+0.001 ]×

【注 2】 A568 为 HbCO 吸光度之差的波长；A581为 Hb 吸

光度之差为零的波长。

〇 血清/血浆中 Hb 的测定步骤及计算公式：

取 0.05mL 样本（血清/血浆）与 2.5mL 的血红蛋白测定应

用液（即将试剂五的浓缩液进行 100 倍稀释），混匀，静置 5

分钟后，1cm 光径蒸馏水调零，波长 540nm 测定各管吸光度

值。

血红蛋白含量的计算：

血红蛋白含量（g/L）= Α540 × 73.54

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