内源性一氧化碳（CO）测试盒 生化试剂

内源性一氧化碳（CO）测试盒

（测全血）

一、 检测意义：

一氧化碳（carbon monoxide，CO）是与一氧化氮

（NO）极相似的小分子气态物质。90 年代以来的大量

研究揭示，生物体内源性 CO 不仅作为一种新型的神经

递质参与中枢神经系统的信息传递，还具有舒张血管、

抑制血管平滑肌和血管内膜增殖、抑制血小板聚集、调

节体内激素分泌、抑制细胞凋亡等多种生物学功能，在

机体多种生理及病理状态中发挥重要的作用。

二、 测定原理：

根据碳氧血红蛋白（HbCO）和还原血红蛋白（Hb）

吸收光谱的差异，选择 HbCO 吸光度之差最大而 Hb 吸

光度之差为零的两个波长，应用双波长分光光度法测定

样本在这两个波长下的吸光度差值（△OD），再通过标

准曲线求出 HbCO 百分浓度，代入公式计算出内源性一

氧化碳（CO）含量。

三、 试剂组成及配制：（50T/48 样）

试剂一：溶血剂，100mL×1 瓶，4℃保存。

试剂二：缓冲液，100mL×2 瓶，4℃保存。

试剂三：碳氧血红蛋白测定粉剂×6 瓶，4℃避光密封保

存。

碳氧血红蛋白测定工作液的配制：临用前，往每瓶测定

粉剂中加入 23 mL 试剂二缓冲液，加盖颠倒混

合，使溶解，现用现配，用多少配多少，

2 小时内用完，用黑袋注意避光。

试剂四：制作 HbCO 百分曲线用的还原粉剂×6 支，4℃

避光密封保存。

试剂五：血红蛋白 Hb 测定浓缩液，1mL×2 支，4℃避

光密封保存。

血红蛋白 Hb 测定应用液的配制：临用前将浓缩液用蒸

馏水 1∶99 稀释，即 100 倍稀释，现用现配。

配好的试剂 2～8℃避光保存，可存放 1 个月以

上。

四、操作步骤：

1、 全血中血红蛋白 Hb 测定及计算：

取 0.01mL 样本（全血）与 2.5mL 的 100 倍稀释的试

剂五应用液（血红蛋白测定应用液），混匀，静置 5 分钟

后，1cm 光径蒸馏水调零，540nm 测定各管吸光度值。

血红蛋白含量的计算：

血红蛋白含量（g/L）= Α540 ×367.7

2、 样本前处理

①、肝素抗凝全血的制备：取末梢血立即加入到肝素

抗凝管内，加盖封口，轻轻搓动，制成肝素抗凝

全血，2～8℃保存。

②、溶血液的制备：取抗凝全血 10μL，加入试剂一溶

血剂 1.2mL 混匀，静置 5 分钟，使溶血，待

测。（如果你的样本量很少并很珍贵，可按样本∶

试剂一溶血剂＝1∶120 进行稀释并溶血）

3、 全血中碳氧血红蛋白测定

①、取经过前处理的样本（全血经前处理制备的溶血

液）0.2mL，加入试剂三碳氧血红蛋白 Hb 测定工

作液 2.3mL，混匀。

②、静置 10 分钟后，试剂二缓冲液调零，1cm 光径，

分别测 568nm 与 581nm 的吸光度。

五、碳氧血红蛋白（HbCO）百分浓度曲线：

【可自行制作 HbCO 百分浓度曲线，也可参照本所

提供的 HbCO 百分浓度曲线】

〇 饱和碳氧血红蛋白与饱和还原血红蛋白的制备

1、取不吸烟健康人肝素抗凝全血 10μL，加入试剂一溶

血液 1.2mL 混匀，静置 5 分钟使溶血。

2、从中取 2 份，每份 0.2mL，加入到两支具塞试管中，

再分别加入 2.3mL 试剂二缓冲液，混匀。

3、在通风橱内，向其中一支试管里通纯一氧化碳（CO），

连续通15分钟，再通入氮气20分钟，得到饱和HbCO

溶液。

4、再向另一支试管通氧气（O2），连续通 20 分钟，得

到饱和 HbO2 溶液。

六、计算公式：

〇 碳氧血红蛋白百分浓度（HbCO%）的计算：

通过分别测定568nm与581nm的吸光度，计算△OD

（A568-A581）的绝对吸光度值差。再由标准曲线，

通过回归方程计算出碳氧血红蛋白百分比浓度，即

HbCO%。

【注 1】如不直接制作百分浓度曲线，也可参照本

所提供的百分浓度曲线，回归方程为：y =

0.822x + 0.001

x 即为△OD（A568-A581）的绝对吸光度值，y 即为碳

氧血红蛋白百分比浓度。

HbCO%=[ 0.822×△OD（A568-A581）+0.001 ]×100%

【注 2】 A568 为 HbCO 吸光度之差最大的波长；A581

为 Hb 吸光度之差为零的波长

〇 溶血液中 Hb 的测定步骤及计算公式：

取 0.01mL 全血样本与 2.5mL 的 100 倍稀释的试剂

五应用液（血红蛋白测定应用液），混匀，静置 5

分钟后，1cm 光径蒸馏水调零，波长 540nm 测定各

管吸光度值。

血红蛋白含量的计算：

血红蛋白含量（g/L）= Α540 ×367.7

七、计算：

1、全血中血红蛋白 Hb 测定及计算：

取 0.01mL 全血样本与 2.5mL 的 100 倍稀释的试剂

五应用液（血红蛋白测定应用液），混匀，静置 5

分钟后，1cm 光径蒸馏水调零，540nm 测定各管吸

光度值。

血红蛋白含量的计算：

血红蛋白含量（g/L）= Α540 ×367.7

2、碳氧血红蛋白测定前处理：

① 肝素抗凝全血的制备：取末梢血立即加入到肝

素抗凝管内，加盖封口，轻轻搓动，制成肝素

抗凝全血，2～8℃保存。

② 溶血液的制备：取抗凝全血 10μL，加入试剂一

溶血剂 1.2mL 混匀，静置 5 分钟，使溶血，

待测。（如果你的样本量很少并很珍贵，可按样

本∶试剂一溶血剂＝1∶120 进行稀释并溶血）

3、全血中碳氧血红蛋白测定

①、取经过前处理的样本（全血经前处理制备的溶

血液）0.2mL，加入试剂三碳氧血红蛋白 Hb

测定工作液 2.3mL，混匀。

②、静置 10 分钟后，试剂二缓冲液调零，1cm 光

径，分别测 568nm 与 581nm 的吸光度。

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