超微量 Ca 2+–ATP 酶测试盒 生化试剂

超微量 Ca 2+–ATP 酶测试盒

(测组织、培养细胞)

一、试剂组成与配制：（试剂盒有效期 6 个月）

二、样本的前处理：

1、组织的前处理：（组织匀浆上清液制备参考实验方法学）

准确称取组织重量，按重量（g）：体积(mL)=1:9

的比例，加入 9 倍体积的生理盐水，冰水浴条件下机

械匀浆，2500 转/分，离心 10 分钟，取上清液（即 10%

的匀浆上清液），再用生理盐水 10 倍稀释成 1%，同时

用考马斯亮蓝试剂测定组织蛋白（试剂本所有售）。如

果预试结果太高，再将 1%的组织匀浆稀释成不同浓度

再进行预试后再决定取样浓度。

2、培养细胞的前处理：将培养细胞消化，离心，弃上清，

留下层细胞，每管加 0.2～0.3mL 生理盐水或匀浆介质

制备成 10 7 /cm3细胞悬液，即 10 7 /mL，再进行破碎。破

碎细胞方法有三种：①、用匀浆器匀浆。②、用超声粉

碎器粉碎。③、反复冻溶 3 次（第③种方法有时会影响

酶活力）。制备好的细胞悬液不需要离心，同时用考马

斯亮蓝试剂测定组织蛋白（试剂本所有售）。再将细胞

匀浆液稀释成不同浓度进行预试，根据预试结果决定取

样浓度。

[注 1]：在测试加样前要摇匀后取样。

[注 2]：不可用磷酸盐缓冲液或含磷的试剂作为样本匀

浆或稀释样本。

[注 3]：预试结果将绝对吸光度值（测定管吸光度值—

对照管吸光度值）控制在 0.2 左右为宜。

五、测定意义：

ATP 酶存在于组织细胞及细胞器的膜上，是生物膜

上的一种蛋白酶，它在物质运送、能量转换以及信息传

递方面具有重要的作用，机体在缺氧及一些疾病状态下，

此酶活力发生一系列改变，另外有些遗传疾病也与此酶

活力有关。

六、测定原理：

ATP 酶可分解 ATP 生成 ADP 及无机磷，测定无机

磷的量可判断 ATP 酶活力的高低。

 超微量 Ca 2+–ATP 酶测试盒