微量丙二醛（MDA）测试盒 检测服务

微量丙二醛（MDA）测试盒

（比色法）

本试剂盒是在原MDA 试剂盒针对一些含量较少的样本

（比如培养细胞及细胞上清）测试效果不是太好的的基础上

改进的一种更为灵敏、简便的测试方法。

一、测试原理：

过氧化脂质降解产物中的丙二醛 （MDA）可与硫代巴

比妥酸（TBA）缩合，形成红色产物,在 532nm 处有最大吸

收峰。因底物为硫代巴-比妥酸（Thibabituric Acid TBA）所

以此法称 TBA 法。

二、测试所需仪器和试剂：

可见光分光光度计，可调到 95℃左右的恒温水浴箱或

沸水浴锅，离心机,无水乙醇(分析纯),冰醋酸(分析纯)。

三、试剂盒组成与配制(50 管/24 样 A003-2-1)：

试剂一：液体 10mL×1 瓶，4℃保存。

试剂二：液体 6mL×1 瓶，用时加 170mL 双蒸水混匀，4℃

冷藏。（注意不要碰到皮肤上）。

试剂三：粉剂×1 支，用时将粉剂加到 32mL 双蒸水中，加

热到 90℃～100℃，充分溶解后再加冰醋酸 30mL，

混匀后冷却至室温，配好的试剂避光室温保存。

（注：冰醋酸自备）

标准品：10nmol/mL 四乙氧基丙烷 5mL×1 瓶，4℃冷藏。

四、试剂盒组成与配制（100 管/48 样 A003-2-2）：

试剂一：液体 20mL×1 瓶，4℃保存。

试剂二：液体 12mL×1 瓶，用时每瓶加 340mL 双蒸水混

匀,4℃冷藏（注意不要碰到皮肤上）。

试剂三：粉剂×1 支，用时将粉剂加到 62mL 双蒸水中，加

热到 90℃～100℃，充分溶解后再加冰醋酸

60mL，混匀后冷却至室温，配好的试剂避光室温

保存。（注：冰醋酸自备）

标准品：10nmol/mL 四乙氧基丙烷 5mL×1 瓶，4℃冷藏。

水浴（或用锅开盖煮沸）40 分钟，取出后流水冷却， 532nm

处，1cm 光径，双蒸水调零，测各管吸光度值 A。

a* 表示所取的样品量、标准品量、无水乙醇的量、试剂一的量，

四者均相等。例如样品取 0.1mL 则标准品、无水乙醇、试剂

一也取 0.1mL，若样品取 0.2mL 则标准品、无水乙醇及试剂

一也取 0.2mL。因吸光度与加样量呈正比曲线，因而结果不

受影响。

** 对照管每个样本都需要做。

2、参考取样量：血清（浆）取 0.1～0.2mL。低密度脂蛋白悬

液取 0.1～0.2mL 。细胞悬液及细胞上清取

0.1～0.2mL。

3、规范操作方法标准管参考吸光度：当标准品取样量为 0.1mL

时，则标准管吸光度减去空白管的吸光度为

0.065～0.070（1cm 光径）。当标准品取样量为

0.2mL 时，则标准管吸光度减去空白管的吸光

度为 0.130～0.140（1cm 光径）。

4、规范操作方法及简便操作方法中，若发现检测样本吸光度

太低，可以将水浴时间 40 分钟延长至 80 分钟，但您的同

一课题中 MDA 的检测都必须延长至 80 分钟，以免造成批

间差异。

六、简便操作方法：（如果样本数量很多，您可以采用简便操作

方法。）

1、混合试剂的配制：

工作液Ⅰ的配制:试剂一:试剂二:试剂三= a*:3:1,用多少配

多少,配好后当天测定；

工作液Ⅱ的配制:试剂一:试剂二: 50%冰醋酸= a*:3:1,用多

少配多少,配好后当天测定。

注:a*表示与样本的取样量相同,单位为毫升(mL)

旋涡混匀器混匀，试管口用保鲜薄膜扎紧，用针头刺一小

孔，95℃水浴（或用锅开盖煮沸）40 分钟，取出后流水冷却，

532nm 处，1cm 光径，双蒸水调零，测各管吸光度值。

a* 表示所取的样品量、标准品量、无水乙醇的量、试剂一

的量，四者均相等。例如样品取 0.1mL 则标准品、无水

乙醇、试剂一也取 0.1mL，若样品取 0.2mL 则标准品、

无水乙醇及试剂一也取 0.2mL。因吸光度与加样量呈正

比曲线，因而结果不受影响。

** 对照管每个样本都需要做。

注 1：以上规范操作法及简便操作法适用于人及各种动植物

的样本（包括血清、动植物组织及体液、细胞及细胞

培养液等）。

注 2：规范操作方法及简便操作方法中，若发现检测样本吸

光度太低，可以将水浴时间 40 分钟延长至 80 分钟，

但您的同一课题中 MDA 的检测都必须延长至 80 分

钟，以免造成批间差异。

七、测定意义：

机体通过酶系统与非酶系统产生氧自由基，后者能攻击

生物膜中的多不饱和脂肪酸（polyunsaturated fatty acid，

PUFA），引发脂质过氧化作用，并因此形成脂质过氧化物。

如：醛基（丙二醛 MDA）、酮基、羟基、羰基、氢过氧基或

内过氧基，以及新的氧自由基等。脂质过氧化作用不仅把活

性氧转化成活性化学剂，即非自由基性的脂类分解产物，而

且通过链式或链式支链反应，放大活性氧的作用。因此，初

始的一个活性氧能导致很多脂类分解产物的形成，这些分解

产物中，一些是无害的，另一些则能引起细胞代谢及功能障

碍，甚至死亡。氧自由基不但通过生物膜中多不饱和脂肪酸

（PUFA）的过氧化引起细胞损伤，而且还能通过脂氢过氧

化物的分解产物引起细胞损伤。因而测试 MDA 的量常常可

反映机体内脂质过氧化的程度，间接地反映出细胞损伤的程

度。

MDA 的测定常常与 SOD 的测定相互配合，SOD 活力的

高低间接反应了机体清除氧自由基的能力，而 MDA 的高低

又间接反应了机体细胞受自由基攻击的严重程度，通过 SOD

与 MDA 的结果分析有助于医学、生物学、药理及工农业生

产的发展。

八、注意点：

1、试管要干净，尤其测微量样品时更为重要。

2、配制试剂时要充分混匀。测试过程中第一管吸的试剂要

丢弃，加样品或试剂时要垂直加，不要加在管壁上。95℃

水浴前要充分混匀。

3、水浴时间及温度要固定。没有水浴锅的单位可用铝锅、

铝盒、铝盆等开盖煮沸即可。

4、高脂样本操作时，离心沉淀一定要充分，否则影响吸光

度，造成结果不稳定。这种情况可增加离心转速（3000

转/分以上）或者延长离心时间使沉淀。

5、冬天若发现测试溶液呈雾状可以轻轻放水浴箱稍稍加

温，待溶液溶解呈透明状态用移液器吸取放入比色杯

中，若仍然呈雾状，则考虑为高脂血症。

6、样本取样量：若您的样量较多，取样量可以加倍，抽提

过程中，双蒸水、无水乙醇、氯仿均要加倍。若您的样

本为贫血病人的血样，则取样量也要加倍，抽提过程中，

双蒸水、无水乙醇、氯仿的量则不变。

7、95℃水浴时最好用带盖的试管，以免反应液的蒸发。若

没有带盖的试管可用冰箱保鲜膜盖好，用橡皮筋扎好后

在保鲜膜上用针刺一小孔即可代替盖子。

九、本试剂盒优点：

1、本试剂盒中试剂均无刺激性气味，对操作人员无任何毒

害。

2、快速准确，操作简便，每小时可测 100 例以上样本。

3、灵敏度高，血清或血浆样品只需 0.1mL,或者更少。

4、再现性好，变异系数 CV=2.0%，同一份标本数次测试结

果相差极微。

5、呈色稳定，呈色后半天内测吸光度不变。

6、试剂稳定，保质期一年；试剂三配制后避光室温保存至

少 3 个月（颜色变成咖啡色即不可使用）。

7、血清样品放置 4℃，3～5 天内测试结果不变。-70℃以下

可保存 3 个月至半年。

8、测试面广，可测血清（浆）、各种组织匀浆，培养细胞等。

9、主要原料均为进口，但价格适中。

10、不需昂贵与特殊仪器，只需恒温水浴箱或者铝锅、铝盆

开盖煮沸，及 721、722、751、752 分光光度计任一型

号均可。

11、不受气温等外界因素的影响。是目前国内MDA

测试方法。

 微量丙二醛（MDA）测试盒