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2018-04-10Cu 2+ - ATP 酶测试盒
(100 管/50 样)
一、测定原理:
ATP 酶可分解 ATP 生成 ADP 及无机磷,测定无机磷的
量可判断 ATP 酶活力的高低。Cu 2+ -ATPase 酶是一种能被
钾激活而可被钒酸抑制的酶。
三、规范操作步骤:
1、样本前处理:
准确称取组织重量,按重量(g)︰体积(mL)=1
︰9 的比例,加入 9 倍体积的生理盐水,冰水浴条件下
机械匀浆,制备成 10%的组织匀浆,2500 转/分,离心
10 分钟,取得的上清液再用生理盐水按 1︰4 稀释制备
成 2%的组织匀浆。(具体操作见我所《实验方法学》)
四、简便操作法:(如果您的样本量很大,您可以参考此方法)
1、测试前将对照管试剂及测定管试剂分别配成混合试剂 A
液和 B 液,具体配法如下:
根据规范操作表中各管的试剂量乘以您所需要测
试的样本数(n)再放 1~2 只管的量(避免吸到最后试
剂量不够)然后纵向混合成 A 液(对照管的加入液)及
B 液(测定管的加入液)
六、测定意义:
ATP 酶存在于组织细胞膜及细胞器膜上,是生物膜上
的一种蛋白酶,它在物质运送、能量转换以及信息传递方
面具有重要的作用,机体在缺 O2及一些疾病状态下,此酶
活力发生一系列改变,另外有些遗传疾病也与此酶活力的
高低有关。
七、注意点:
1、 此法具有微量、灵敏、快速的特点。所以对测定所用试管
要求严格,要没有一点磷,若试管放过磷酸或磷酸盐缓冲
液,一定要洗得非常干净,要先用洗洁精加水煮,再用自
来水冲,最后用双蒸水冲干净。用一次性塑料管或新
玻璃管,避免磷污染是检测成败的关键。
2、 定磷剂配好后,不可放置太久,一般保存一天,现用
现配。随时放冰箱。
3、 采用先配测定管和对照管混合液,然后按简化操作步
骤进行检测,这样快捷、准确。
4、 所有配试剂的器皿均要专用,包括吸硫酸的吸管及盛水的器皿。
5、本研究所有加厚的一次性塑料试管供应,请在订购试剂的
同时订购一次性塑料试管。
Cu 2+ - ATP 酶测试盒