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2018-04-10谷-氨酰胺合成酶(GS)测定试剂盒
(比色法)
一、测定意义
谷-氨酰胺合成酶(Glutamine synthetase,GS)主要存在于植物中,是生物体内氨同化的关键酶之一,催化铵
离子和谷-氨酸合成谷-氨酰胺,不仅可以防止过多的铵离子对生物的毒性,而且谷-氨酰胺也是氨的主要储存和运输形式。
二、测定原理
GS 在 ATP 和 Mg 2+的存在下,催化铵离子和谷-氨酸合成谷-氨酰胺;谷-氨酰胺进一步转化为γ-谷氨酰基异羟肟酸,在酸性条件下形成的络合物在 540nm 处有吸收峰,可用分光光度计测定其吸光值来判定 GS 的活力。
三、所用仪器与耗材
可见光分光光度计、恒温水浴锅、离心机、1mL 玻璃或石英比色皿、研钵、蒸馏水等
四、试剂组成和配置(24T)
提取液:30mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:12mL×1 瓶,-20℃保存。使用时 37℃预热 20min,充分混匀,如有沉淀,静置 10min,取上清待用。
试剂二:12mL×1 瓶,-20℃保存。使用时 37℃预热 20min,充分混匀,如有沉淀,静置 10min,取上清待用。
试剂三:粉剂×2 瓶,-20℃保存。使用时每瓶粉剂加入 5mL 蒸馏水充分溶解待用。
试剂四:15mL×1 瓶,4℃保存。
五、样本前处理
1、 组织:按照组织重量(g):提取液体积(mL)为 1:10 的比例混合后,冰水浴匀浆,4000 转/min 离心 10min,取上清置冰上待测。
2、 血清(浆):直接取样测定。
3、 细胞、细菌或组织样品:收集细胞或细菌于离心管中,离心后弃上清,按照细胞或 细菌数量(10 4个):提取液体积(mL)为 500:1 的比例混合,超声波破碎细胞或细菌(条件:冰浴、功率 20%或 200W、超声3s、间隔 10s、重复 30 次)后待测。
谷-氨酰胺合成酶(GS)测定试剂盒