谷-胱甘肽还原酶(GR)测试盒 生化试剂

谷-胱甘肽还原酶(GR)测试盒

（50 管/48 样）

一、测定意义：

谷-胱甘肽还原酶(Glutathione Reductase)是一种黄素酶，

每分子酶蛋白含有一分子的 FAD。由辅酶 NADPH 供氢，

催化氧化型谷-胱甘肽（GSSG），还原成还原型谷-胱甘肽

（GSH）。还原型谷-胱甘肽（GSH）可使含巯基（-SH）的

酶处于还原状态及活性状态，维持红细胞膜的完整性，防止

血红蛋白氧化。

GR 定位于微粒体及细胞液部分。因各脏器的组织细胞

普遍含有 GR，因而 GR 在机体的氧化还原反应中起了举足

轻重的地位。

二、测定原理：

氧化型谷-胱甘肽（GSSG）在谷-胱甘肽还原酶 GR 的催

化下，由 NADPH 供氢，使 GSSG 还原生成还原型谷-胱甘肽

(GSH)后，GSH 增加，NADPH 减少。在 340nm 处可检测到

NADPH 的吸光度值的下降。

三、试剂组成：（50 管/48 样）

试剂一：60mL×2 瓶，4℃保存 6 个月。

试剂二：粉剂×4 支，

4℃保存 6 个月；用时每支加双蒸水 1mL

充分溶解后备用，4℃保存。

试剂三：粉剂×2 支，

4℃保存 6 个月；用时每支加双蒸水 1mL

充分溶解后备用，-20℃以下保存。

工作液的配制：按试剂一︰试剂二︰试剂三=2300︰60︰30

的比例进行配制，用多少配多少，现用现配，余下

的 4℃保存 4～5 天（使用前在 37℃预温 5 分钟）。

四、血清（浆）中 GR 活力的测定：

1、血清（浆）样本前处理：

血清不需要离心；血浆要 2000～3000 转/分，离心 8 分钟。

2、血清（浆）中 GR 活力测定的操作过程：

①、将紫外分光光度计于 340nm 处，1cm 光径石英比色皿，

用双蒸水调零；(石英比色皿准备两只,一只用于调零,

一只用于测定)。

②、往相应编号的试管中加入 50μL 新鲜血清（浆），吸取

工作液 2.4mL 冲入试管中，快速混匀，并计时；

③、迅速倒入石英比色皿中，紫外分光光度计，340nm 处

比色，30 秒时读取吸光度值 A1；

④、将此反应液倒入原试管中置 37℃准确水浴 2 分钟，再

迅速倒入石英比色皿中，

2 分 30 秒时读取吸光度值 A2；

⑤、求出 2 次吸光度差值（△A=A1-A2）。

[注]：第一次读数时的时间可以不固定(20 秒、40 秒等都可

以，但不要太长），只要读 A1 和 A2 之间的时间差为

2 分钟即可；如果 A1 和 A2 值接近，可以增加样本体

积，或者延长反应时间（如 5min 或 10min）。

3、血清（浆）中 GR 的计算：

①、血清（浆）中 GR 的活力单位定义：

每升血清（浆）每分钟使反应体系中底物 NADPH

的浓度改变 1mM 所需的酶量为一个酶活力单位。

6.22 为 NADPH 在 340nm 波长 1cm 光径的消光系数。

d：比色光径，1cm；

T：反应时间，2min；

V 样：取样量，0.05mL。

五、组织匀浆中 GR 活力的测定：

1、组织样本的前处理：

准确称取组织重量，按重量（g）:体积（mL）=1:9 的

比例，加入 9 倍体积的生理盐水，冰水浴条件下机械匀浆，

制成 10%的组织匀浆，2500 转/分，离心 10 分钟，取上清

液待测

2、组织中 GR 活力测定的操作过程：

①、将紫外分光光度计于 340nm 处，1cm 光径石英比色皿，

用双蒸水调零；(石英比色皿准备两只,一只用于调零,

一只用于测定)。

②、往相应编号的试管中加入 20μL 组织匀浆上清液，吸取

工作液 2.4mL 冲入试管中，快速混匀，并计时；

③、迅速倒入石英比色皿中，紫外分光光度计，340nm 处

比色，30 秒时读取吸光度值 A1；

④、将此比色液倒入原试管中置 37℃准确水浴 2 分钟，再

迅速倒入石英比色皿中，

2 分 30 秒时读取吸光度值 A2；

⑤、求出 2 次吸光度差值（△A=A1-A2）。

[注]：第一次读数时的时间可以不固定(20 秒、40 秒等都可

以，但不要太长)，只要读 A1 和 A2 之间的时间差为

2 分钟即可；如果 A1 和 A2 值接近，可以选择更大的

样本浓度，或者延长反应时间（如 5min 或 10min）。

3、组织匀浆中 GR 活力单位的计算：

①、组织匀浆中 GR 活力单位的定义：

每克组织蛋白每分钟使反应体系中底物 NADPH 的

浓度改变 1mM 所需的酶量为一个酶活力单位。

6.22 为 NADPH 在 340nm 波长 1cm 光径的消光系数。

d：比色光径，1cm；

T：反应时间，2min；

V 样：取样量，0.05mL；

N：样本测试前稀释倍数。

Cpr：组织匀浆蛋白浓度，gprot/mL（prot 指蛋白）

谷-胱甘肽还原酶(GR)测试盒