信帆生物：外泌体提取实验技术服务

信帆生物：外泌体提取实验技术服务

信帆生物主营产品: 质控样品，干扰物质，抗体抗原，elisa试剂盒，动物血制品，生化试剂盒等。实验代做服务：HE染色/特殊染色/技术服务、免疫组化实验服务、Western blotting实验服务、RT-PCR实验技术服务,QPCR(荧光定量PCR）、酶联免疫ELISA、生化测试、液相气相检测等。

外泌体(exosome)：是细胞主动向胞外分泌的大小均一(40-200nm)的囊泡样小体，该囊泡可携带多种蛋白质、mRNA、miRNA等，参与细胞通讯、细胞迁移、血管新生和肿瘤细胞生长等过程。根据外泌体的大小和密度，用不同的离心速度，达到分离出外泌体的超速(差速)离心法，是学术上用的比较多且较认可的外泌体的提取方法，被认为是外泌体提取的黄金方法。

实验原理（仅供参考）

外泌体与细胞碎片、凋亡小体等颗粒大小、密度不同，利用离心力、分子筛或聚合物沉淀等方式，将外泌体与杂质分开，得到富集的外泌体。

常用提取方法

1、差速超速离心法：经典方法，逐级离心去除细胞、碎片、大囊泡，最后超高转速沉淀外泌体。纯度较好，但耗时，需超速离心机。

2、聚合物沉淀试剂盒法：PEG 沉淀外泌体，操作简单，无需超速离心机；缺点是杂质较多。

3、密度梯度离心：按密度分层分离，纯度最高，操作复杂，多用于高水平机制研究。

4、尺寸排阻色谱 SEC：依据颗粒大小分离，囊泡结构保存好，富集能力弱。

操作步骤仅供参考（差速超速离心）

1、收集样本，低速离心去除完整细胞；

2、2000 g 离心去除细胞碎片；

3、10000 g 离心去除凋亡小体、大胞外囊泡；

4、100000 g 超速离心，收集外泌体沉淀；PBS 重悬后再次超速洗涤；

5、PBS 重悬沉淀，分装，-80℃保存；

6、质控鉴定：NTA 测粒径浓度、TEM 观察囊泡形态、WB 检测 CD63/CD81/TSG101 标志物。 

样本运输要求：

1、细胞上清样本：一个样本提供70ml的培养上清(细胞在含常规FBS培养基中培养一定时间，待细胞融合度约为60% - 70%时，移去原有含FBS的培养基，换成新鲜的含无外泌体血清的培养基，继续培养3天左右，细胞融合度达到80%-95%左右时，收取细胞上清），干冰运输到实验室。

2、血清样本：血液经普通采血管采集后室温静置30min，3000g离心15min，收集上层血清，5ml，-80℃纯干冰运输。