信帆生物：免疫学研究，你的工具升级了吗？

免疫系统不仅影响着疾病状态，也影响科学研究 – 从疫苗开发到白血病，从传染病到关节炎，从免疫治疗到自身免疫。这些领域的探索需要运用各种技术和仪器，从细胞毒性分析到质谱分析。这些技术交织在一起，形成协同效应，比如免疫治疗就综合了免疫学和细胞治疗的原理。

每个实验室在研究具体问题时，无疑都有自己的一套技术。不过，一些新的趋势正在兴起。毫无疑问，这并不是免疫学所*的。但话说回来，免疫学的问题也不属于单个学科。

多维度分析

一提到免疫学，你通常会想到根据细胞的大小和粒度以及荧光标记来分析（或分选）大量的细胞。流式细胞仪能够根据抗原受体的存在对免疫细胞进行分型，比如CD4和CD8抗原的表达。细胞内抗原的染色已变得司空见惯，而分泌的蛋白（如细胞因子）甚至也能同时捕获和观察。

宾夕法尼亚大学人类免疫学核心实验室的主任Eline Luning Prak认为：“目前有着更多维度分析的趋势，这样细胞将有着更好的表型分辨率。”这能够在白血病和淋巴瘤治疗后更好地追踪残留疾病，也能够寻找克隆演化。

“zui多15种颜色……流式是目前的，”斯坦福大学医学院人类免疫监控中心（HIMC）的主任Holden Maecker如是说。不过他提到了另一个更令人兴奋的产品，Fluidigm的CyTOF质谱流式细胞仪。这台仪器有点像流式细胞仪，不过不是利用光检测器来区分荧光标记的抗体，而是利用原子质谱仪来区分同位素金属结合的抗体。

“它真的扩展了你在单管中所能开展的分析，并连接了所有数据，”Maecker解释道。当然，没有什么是的。CyTOF仪器要比流式细胞仪贵得多，而且它更慢 – 每秒500个细胞，相对而言流式细胞仪每秒能分析多达10,000个细胞。“当你讨论稀有细胞，或分析500个样品时，这就是真正的差异，”他说。

分析这么多的参数，也往往意味着这种技术会超出我们分析数据的能力。研究人员正在利用概率分组、SPADE和概率状态建模，来分析多色流式细胞仪和CyTOF的数据。Prak指出：“你不能指望你的头脑。你需要建立一个模型，系统地比较同一患者在不同时间的样本，或比较这种疾病和那种疾病的患者，并让电脑说出它们之间的差别，而不仅仅是目测。”

检测新力量

流式细胞仪不仅能分析蛋白质，也能分析RNA。利用Affymetrix的PrimeFlow™ RNA分析，透化的细胞与互补的寡核苷酸探针一起孵育。之后通过分支DNA（bDNA）信号扩增技术和传统的流式细胞仪，可检测RNA。Affymetrix负责eBioscience业务的副总裁Dara Grantham Wright表示：“我们zui多检测三种RNA，并同时检测五种蛋白质。”

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