信帆生物：Rt-PCR实验准备及与操作步骤

一、实验器具与材料： 
1、移液枪：1ml、200μl、20μl、10μl、2μl 
2、吸头：1ml、200μl、20μl 
3、匀浆管：5ml 
4、吸头台：放置1ml吸头的一个，放置20μl吸头的一个 
5、EP 管：1.5ml、0.2ml、100μl 
6、试剂瓶：2个60ml的棕色试剂瓶（广口，带盖） 
1个125ml的白色试剂瓶（放无水乙醇） 
7、量筒：50ml、250ml、500ml 
8、容量瓶：250ml、500ml、1000ml 
9、试管架：5ml、 1.5ml、20μl 
10、盐水瓶：250ml、500ml各2个备用，一个装无水乙醇，另一个装DEPC水 
11、铝制饭盒：4个 
12、塑料小饭盒：1个 
13、大瓷缸：2个 
14、锡泊纸：一卷 
15、卷纸：2卷 
16、三角烧瓶：带盖，稍大 


二、实验器具的处理与准备 
1、塑料制品：（包括枪头、EP管、匀浆管等） 
先将DEPC水从容量瓶中倒入瓷缸中，将塑料制品逐个浸泡其中，其中小枪头需要吸管打入DEPC水，过夜，然后高压，再烤干备用，实验前将枪头等放入吸头台，再高压一次（EP管） 
2、玻璃制品：泡酸过夜，冲洗干净，蒙锡纸烤干备用（DEPC水泡）（洗净后先泡1‰DEPC过夜，再烤干） 
3、匀浆器：（包括剪刀、镊子）先洗净后，再高压（不需要泡DEPC） 
三、试剂配制： 
1、DEPC水：吸出1ml放在1000ml双蒸水中配成1‰DEPC水，放在1000ml容量瓶中静置4小时备用。 
2、75%乙醇：用无水乙醇+DEPC水配，然后放-20℃保存（其中DEPC 水需先高压） 
3、异丙醇：放入棕色瓶中 
4、氯仿：放入棕色瓶中 
5、琼脂糖 
四、几种缓冲液的配制： 
1、电泳缓冲液： 
Tris 54g 
硼酸 27.5g 
0.5M EDTA 20ml？ pH8.0 
蒸溜水 1000ml 
5×TBE （贮存液） 
再将5×TBE稀释10倍成0.5TBE就可以在电泳时使用（即工作液浓度），如取50ml贮存液+450ml水--→500ml工作缓冲液 
2、上样缓冲液： 
0.25%溴酚蓝 
0.25%二甲苯青FF 
30%甘油 
6×缓冲液，4℃保存 
五、琼脂糖凝胶的配制： 
1、 1.0%： 
1.0g琼脂糖+100ml电泳缓冲液，微波炉中火30秒至沸腾，熔化的琼脂物冷却至60℃时加入10mg/ml溴化乙锭 2.5μl，充分混匀，将温热的凝胶倒入已置好梳子的胶膜中，在室温下放置30-45min后现进行电泳。 
2、1.5%: 
同上，将琼脂糖的量改为1.5g

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