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TTC法测种子生活力

发布时间:2019-05-17   点击次数:75次

   凡有生活力的种子胚部在呼吸作用过程中都有氧化还原反应,而无生活力的种胚则无此反应。当TTC溶液渗入种胚的活细胞内,并作为氢受体被脱氢辅酶(NADH或NADPH)还原时,可产生红色的三苯基甲 (TTF),胚便染成红色。当种胚生活力下降时,呼吸作用明显减弱,脱氢酶的活性亦大大下降,胚的颜色变化不明显,故可由染色的程度推知种子的生活力强弱。TTC还原反应如下:NN+ NCl+NN+HCl(无TTFTTC色)(红色)
【仪器与用具】
培养皿2套;镊子1把;单面刀片1片;垫板(切种子用)1块;烧杯1个;棕色试剂瓶;解剖针1把;搪瓷盘1个;pH试纸。
【试剂】
TTC溶液的配制:取1g TTC溶于1L蒸馏水或冷开水中,配制成0.1%的TTC溶液。药液pH应在6.5~7.5,以pH试纸试之(如不易溶解,可先加少量酒精,使其溶解后再加水)。
【方法】
1.将玉米、小麦等作物的新种子、陈种子或死种子,用温水(30℃)浸泡2~6h,使种子充分吸胀。
2.随机取种子2份,每份50粒,沿种胚中央准确切开,取每粒种子的一半备用。
3.把切好的种子分别放在培养皿中,加TTC溶液,以浸没种子为度。
4.放入30~35℃的恒温箱内保温30min.也可在20℃左右的室温下放置40~60min.
5.保温后,倾出药液,用自来水冲洗2~3次,立即观察种胚着色的情况,判断种子有无生活力,把判断结果记入表上。
【注意事项】
1.TTC溶液现配现用,如需贮藏则应贮于棕色瓶中,放在阴凉黑暗处,如溶液变红则不可再用。
2.染色温度一般以25~35℃为宜。
3.判断有生活力的种子应具备:胚发育良好、完整、整个胚染成鲜红色;子叶有小部分坏死,其部位不是胚中轴和子叶连接处;胚根尖虽有小部分坏死,但其它部位完好。 4.判断无生活力的种子应具备:胚全部或大部分不染色;胚根不染色部分不限于根尖;子叶不染色或丧失机能的组织超过1/2;胚染成很淡的紫红色或淡灰红色;子叶与胚中轴的连接处或在胚根上有坏死的部分;胚根受伤以及发育不良的未成熟的种子。
5.不同作物种子生活力的测定,所需试剂浓度、浸泡时间、染色时间不同。现将主要作物种子生活力测定所需条件列入表。
TTC法测定主要作物种子生活力要点
在35℃下
作 物 水 稻、高粱、玉米及麦类作物 棉花、荞麦、蓖麻 花生 甜菜 大嘛向日葵 大豆 菜豆 亚麻 二叶草
种子准备 去壳纵切 纵切 剥去种皮 剥去种皮 无须准备
TTC浓度(%)
染色时间(h)0.1 0.1 1.0 0.1 1.02~3 0.5~1 2~3 3~4 3~4   
 
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