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全血线粒体提取试剂盒应该如何正确使用

更新时间:2020-06-19   点击次数:913次

全血线粒体提取试剂盒应该如何正确使用

上海信帆生物供应全血线粒体提取试剂盒,可以提取血液中线粒体,产品现货供应,欢迎大家随时咨询!除此之外我们也供应组织线粒体提取试剂盒,细胞线粒体提取试剂盒,有需要的老师可以随时咨询!

一,试剂盒组份

组份                          XF9701-A (50T)    XF9701-A (100T)

红细胞裂解液(10X)              100ml             100ml*2

白细胞裂解液                     50 mL              100 mL

线粒体清洗液                      25 mL             50 mL

线粒体保存液                     5 mL                 10 mL

 

二,保存条件

本试剂盒三个月内使用可 4℃储存,可置-20℃。

三,说明

本试剂盒可用于从血液中分离完整而纯化的线粒体。

其制备物,可以被用于细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究。但不适用于进一步 DNA 提取。

四,操作步骤

1. 血液处理:

血液要求:非肝素钠抗凝血,使用新鲜血液。对于陈旧血液,由于冻凝过程中冰晶已经对细胞核膜和

线粒体膜产生损伤,所以线粒体得率会大大减少,并且完整性也会降低。

a. 对于无核红细胞全血(如哺乳动物处周血),取血约 5ml(适当分成几管),加入 3 倍体积的红细胞裂

解液(稀释后的工作液,下同),混匀,800 × g

5 min 离心收集白细胞。加入 1-2ml 红细胞裂解液(稀

释后的工作液),吹打重悬白细胞,合并于一管中,800 × g 5~10 min 离心收集白细胞。此时如果白细

胞有可见红色,可再次用少量(0.5ml)红细胞裂解液洗细一次。

b. 对于有核红细胞全血(如禽类全血),取约 200-300ul 全血,800 × g 5~10 min 离心收集全细胞,用

生理盐水或者 PBS 清洗两次,留沉淀去上清。清洗时请用去尖吸头吹打。

2. 在收集到的细胞中,加入 1.0 mL 冰预冷的白细胞裂解液重悬细胞,将细胞悬液转移到小容量玻璃匀浆

器内,0℃冰浴研磨 20~40 次;

3. 匀浆物转移到离心管,4℃,1000× g 离心 5 min;

4. 取上清,加入一新的离心管中,4℃,1000× g 再次离心 5 min(一共两次离心,完整去核)。

5.取上清,加入一新的离心管中,4℃, 12,000 × g 离心 10 min。离心后的上清含胞浆成分,可从中

提取胞浆蛋白。将上清转移到新离心管,线粒体沉淀在管底;

6. 在线粒体沉淀中加入 0.5 mL 线粒体清洗液重悬线粒体沉淀,4℃,1000× g 离心 5 min(再次去核);

7.取上清,加入一新的离心管中,4℃, 12,000 × g 离心 10 min。弃上清,高纯度的线粒体沉淀在管

底;

8. 用 50 -100μL 线粒体保存液或合适的反应缓冲液重悬线粒体沉淀,立即使用或-70℃保存。

四 注意事项:

为保证获得完整及尽可能多的线粒体,匀浆条件要示:一是全程低温操作。第二是快速。第三,如有条

件可将匀浆后的碎片在显微镜下观察。

全血线粒体提取试剂盒应该如何正确使用

 

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