信帆生物：PCR技术服务升级！欢迎联系！

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1.技术优势：

*灵敏度高，可以检测低拷贝的目的基因

*高精度，PCR扩增阶段包括3个阶段：指数增，线性增和平台期，96个重复指数增表现出高精度，而平台期则变化差异

*定量能力强，简单的流程就能得到高质量的定量数据

*动力学范围宽，可以定量9个数量级的差异，速度快，节省时间和劳力，不需要电泳检测

*安全，使用荧光染料发光，不用EB或放射性物质，降低对实验人员健康的威胁

*重复性好

2.服务流程

PCR引物、探针设计合成调试→标准品制作→样本核酸抽提反转录→PCR扩增检测→数据初步分析

3.检测方法

   (1) SYBR Green Ⅰ

   游离状态下的SYBR Green分子发出微弱的荧光信号，当与dsDNA双螺旋小沟区域结合时，则发出绿色荧光，可在520nm波长下检测荧光信号，荧光信号的强度与dsDNA数量呈正相关。

SYBR Green Ⅰ染料法的特点：

   高灵敏度，低背景信号，操作简单，不影响酶促反应，价格便宜。

(2)探针法：TaqMan荧光探针，MGB探针

  TaqMan 荧光探针是一种寡核苷酸探针，荧光基团连接在探针的5`末端，一般用FAM、VIC、HEX、Cy3、Cy5等荧光基团，而淬灭剂则在3`末端，一般为TAMRA、BHQ1、BHQ2等，其中TAMRA发出黄色荧光，BHQ1和BHQ2不发出荧光。PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5'-3'外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成*同步。

  TaqMan-MGB探针与普通TaqMan荧光探针相比具有更短的序列和更高的序列特异性，常被用于SNP分型的研究中，有望成为基因诊断和个体化用药分析的技术平台。

  探针法的特点：

  与染料法相比具有更低的背景信号，更高的灵敏度，可以检测低于10个分子的模板，更高的特异性，结果也更准确。同时也具有染料法的操作简单，不影响酶促反应等优点。

◆核酸提取和反转录

根据客户要求提取动物、植物、细胞和细菌等样品DNA或RNA

对所提RNA进行反转录以用于荧光定量PCR反应

◆合成

设计合成各种引物并可根据客户要求负责引物的调试

针对不同引物构建标准品用于定量或相对定量实验

设计合成各种标记探针并可根据客户要求负责探针的调试

◆检测

  mRNA表达检测

   MicroRNA表达和靶基因表达检测

   SNP检测

   基因copy数检测

   病原微生物样品检测

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