反转录试剂盒的组成和使用方法，上海信帆生物供应反转录试剂盒，该产品质量稳定，*！如果有需要，可以找上海信帆生物科技有限公司。

通用反转录试剂盒(M-MLV)
规格：50T/100T
保存：-20℃保存，避免反复冻融，复检期为 1 年。
产品内容：
试剂盒组成 50 次 100 次
M-MLV(200U/μL) 50μL 50μL×2
5×M-MLV Buffer 200μL 400μL
Oligo(dT)16(10uM) 100μL 200μL
RNasin(40U/μL) 25μL 50μL
dNTPs(10mM) 50μL 100μL
RNase-free ddH2O 1mL 1mL×2
说明书 1 份 1 份
产品简介：
本试剂盒适用于各种 RNA 制品的反转录反应。它采用 M-MLV 进行反转录反应，能够获得较
长的反转录产物用于后续的 PCR 扩增和分子克隆实验。
本试剂盒中配置的酶为进口的酶。RT 酶采用进口的 M-MLV，所以 cDNA 更长，基因的信息保
留得更完整！反转录过程中特异的 RNase 抑制剂可有效降低由于外源 RNase 污染而导致实验失败的
风险。本试剂盒使用方便、快捷，可广泛用于 cDNA 克隆及目的基因检测等分子生物学实验。
操作步骤：
一、反转录反应
1、在冰浴的无 RNase 的离心管中加入如下反应成分：
1-5μg 总 RNA 或 50-500ng mRNA
2μL Oligo(dT)16或 2 pmole 基因特异性引物
补 RNase-free ddH2O 至 14.5μL
2、70℃保温 5min 后迅速在冰上冷却 2min，简短离心收集反应液后加入以下各组分：
4μL 5×M-MLV Buffer
1μL dNTPs
0.5μL RNasin
1μL M-MLV
3、42℃温浴 60min，如果是用随机引物，请先将离心管置 25℃温浴 10min，再 42℃温浴 60min。
4、95℃加热 5min 终止反应，置冰上进行后续实验或-20℃保存。
5、若用于后续 PCR 扩增,用 RNase-free ddH2O 将反应体系稀释到 50μL，取 2-5μL 作为 PCR 反应模板。
注意事项：
1、用于 cDNA 合成反应的相关试剂和耗材尽可能用 DEPC 进行处理，并在高压灭菌后使用。有些
试剂不能高压灭菌时，首先用经过灭菌的器具、水等配制溶液后，再将溶液进行过滤除菌处理。
2、试剂盒的各组分应在-20℃保存，避免反复冻融，有效期 12 个月。
3、RNA 样品要避免反复多次冻融，应使 RNA 在冰浴中处于融化状态。

反转录试剂盒的组成和使用方法